ейкоцитів, і тромбоцитів.
Для «Пікоскеля ПС - 4М» найбільш важливими технічними характеристиками є:
визначувана концентрація формених елементів крові від 2 · 103 до 105 см - 3;
визначаються розміри формених елементів від 2 до 12 мкм;
систематична похибка не більше 15%;
випадкова похибка не більше 4%;
час вимірювання однієї проби не більше 40 с.
Робота лічильника формених елементів крові «Пікоскель ПС - 4М» побудована на принципі вимірювання імпедансу і реалізована на рахунку електричних імпульсів, викликаних досліджуваними частками, що проходять через отвір вимірювальної трубки. Досліджувані частинки поміщаються за допомогою дозуючих пристроїв в електропровідну рідина (електроліт), який спільно з ними являє собою вид суспензії.
При запуску циклу вимірювання у вимірювальній трубці виникає вакуум, під дією якого знаходяться в електроліті частинки засмоктуються у вимірювальну трубку через отвір. Коли рівень суспензії всередині вимірювальної трубки досягає першого внутрішнього електрода, між ним і зовнішнім електродом протікає постійний за величиною вимірювальний струм. Електричний опір між електродами значно змінюється кожного разу, коли через отвір вимірювальної трубки проходять частинки з електропровідністю, що відрізняється від електропровідності електроліту. Зміна опору створює імпульси напруги. Підключений до електродів реєструючий вузол може визначити концентрацію частинок. Коли всередині вимірювальної трубки рівень суспензії досягає другого внутрішнього електрода, у вимірювальній трубці створюється тиск, під дією якого той же самий обсяг суспензії з неї виштовхується і, що знаходяться в ньому частинки, знову проходять через вимірювальну трубку.
Підрахунок частинок завжди відбувається в постійному об'ємі ізмерітельной трубки, обмеженому першим і другим внутрішніми електродами. По закінченні циклу вимірювання результати рахунку можна зняти з дисплея лічильника або роздрукувати.
Для визначення значення фону. Була встановлена ??вимірювальна трубка, потім у вимірювальний стакан налили 10 мл чистого фізіологічного розчину з наступним додаванням трьох крапель гемолітико. Далі склянку з фізіологічним розчином був встановлений на столик. Після був обраний режим для вимірювання лейкоцитів при вимірювальному струмі 200 мкА. Значення фону склало 0,7 · 109 шт/л.
Для підрахунку частинок крові однаково придатна кров, взята з вени в пробірку (цільна), а так само проба крові, взята з кінчика пальця (периферична).
Для проведення даного досвіду була використана цільна кров, відібрана у здорових і хворих (ВВР ЧЛО) донорів.
Проведення вимірювання числа лейкоцитів вироблялося наступним чином. Вимірювальна трубка була встановлена ??на 100 мкм, потім був обраний режим рахунку лейкоцитів WBC, з подальшим вибором струму 200 мкА. Далі розбавляємо кров фізіологічним розчином в пропорції 1: 630 (16 мкл крові на 10 мл фізіологічного розчину) і додаємо три краплі гемолізіруюющего розчину (гемолітико). Через три хвилини отриманий розчин був встановлений на вимірювальний столик і виробляємо рахунок лейкоцитів.
Були визначено, що в одному літрі крові донорів міститься 4,6 · 109 штук лейкоцитів. Лімфоцити складають 28% від загального числа лейкоцитів, отже, їх концентрація 1,288 · 109шт/л.
Для виділення лимфоцитарной маси з цільної крові була використана методика [36]. Метод заснований на поділі клітин крові при центрифугировании в градієнті щільності фіколла-урагрофіна.
За добу до виділення лімфоцитів з цільної крові, необхідно приготувати розчин фіколла-урографіну з щільністю 1,093 г/мл. Розчин фіколла-урографіну готувався наступним чином: в невеликій кількості дистильованої теплої води розчинили 4,1 г фіколла 400, додали 10 мл 76% урографіну і додали дистилят. Приготований розчин залишили на добу. Наступного дня довели водою до потрібної щільності. Щільність розчину вимірювали за допомогою ареометра.
Для кожного досліджуваного зразка промарковані по два Еппендорфа місткістю 1,5 мл - A і B. У пробірки, марковані A, внесли за допомогою дозатора по 500 мкл 0,9% розчину NaCl стерильного, а потім таким же чином, помістили 500 мкл цільної крові і акуратно змішали кров з фізіологічним розчином, тим самим стабілізувавши кров.
У Еппендорфа, марковані В, стерильних, внесли по 500 мкл фіколл-урографіну. На фіколл-урографін акуратно, уникаючи змішування, нашаровуються стабілізовану кров, а потім, закривши Еппендорфа, помістили їх в центрифугу Sigma 1-14 на 20 хв при швидкості обертання рівний 400 об/хв. По закінченню 20 хв, вміст Еппендорфа являло собою наступний г...
