2-3 краплі толуолу і потім колбу поміщають у термостат на 14-16 год при температурі 37 В° С. Після цього гідролізат охолоджують, доводять об'єм до 250 дистильованою водою і фільтрують. У фільтраті визначають вміст тіаміну. ​​p> Якщо є необхідність перервати аналіз на 1-2 дні, то перед доведенням об'єму до 250 гідролізат кип'ятять 5 хв, охолоджують, доводять об'єм до 250 і фільтрують. До проведення аналізу фільтрат зберігають у холодильнику в щільно закритій колбі. p> Очищення фільтрату від домішок, що заважають визначенню: в день проведення випробування 25 фільтрату переносять в ділильну воронку місткістю 250, додають 25 бутилового або изобутилового спирту. Воронку струшують протягом 1 хв і після відстоювання для розділення шарів водний шар (нижній) збирають в колбу місткістю 100. p> Аналогічним чином поступають з приготованим робочим стандартним розчином тіаміну. ​​
Окислення тіаміну в тіохром: у три конічні колби відмірюють по 5 очищеного гідролізату. Потім у дві з них додають по 1,2 окисної суміші, а в третю 1,2 розчину гідроксиду натрію концентрації 0,3 г/(контрольний розчин до випробуваному розчину). Всі колби енергійно струшують, додають по 10 изобутилового спирту і знову енергійно струшують протягом 1 хв для вилучення тіохрома. Водний і спиртовий шари розділяють відстоюванням в темному місці. Потім спиртової шар (верхній) зливають у кювети для вимірювання інтенсивності флюоресценції. p> Аналогічним чином поступають з очищеним робочим стандартним розчином тіаміну. ​​
Час з моменту початку екстракції тіохрома до вимірювання його флюоресценції не повинно перевищувати 30 хв.
Вимірювання флюоресценції тіохрома: при роботі на флюорометре марки ЕФ-ЗМА встановлюють світлофільтри для В1, стрілка приладу виводиться на нульовий розподіл по повітрю, потім на ділення 50 одиниць по екстракту тіохрома з робочого стандартного розчину.
При роботі на флюорометре марки ФМ-Ц-2 встановлюють світлофільтри, даюшіе довжини хвиль збудження 360 нм і флюоресценції - 420 нм.
Вимірювання інтенсивності флюоресценції розчинів здійснюють по відношенню до бутилового або Ізобутиловий спирту.
При роботі на флюорометрах інших марок інтенсивність флюоресценції тіохрома вимірюють при світлофільтрах, що дають діапазон довжин хвиль збудження в області 360-390 нм і флюоресценції 400-450 нм.
Обробка результатів
Масову дано тіаміну (Х), мг на 100 г продукту, обчислюють за формулою
або
де А - інтенсивність флюоресценції випробуваного розчину, середнє з двох паралельних визначень, од. приладу;
А1 - інтенсивність флюоресценції контрольного розчину до випробуваному розчину, од. приладу;
В - інтенсивність флюоресценції стандартного розчину тіаміну, середнє з двох паралельних визначень, од. приладу;
В1 - інтенсивність флюоресценції контрольного розчину до стандартного розчину тіаміну, од. приладу;
Х1 - масова частк...
