вивчення характеру експресії генів. Останнім часом метод ПЛР дозволив проводити дослідження в нових областях, таких як контроль автентичності харчових продуктів, аналіз наявності генетично модифікованої ДНК або мікробіологічного зараження [3].
Існує велика кількість способів отримати дані про концентрацію нуклеїнових кислот в пробі методом ПЛР, але всі вони вимагають додаткових трудомістких етапів роботи, пов'язаних з попередньою растітровкой виділеної з аналізованої проби ДНК, або отриманих в ході ПЛР амплікон, що призводить до збільшення часу, необхідного для постановки аналізу і складності інтерпретації отриманих результатів. Також, наявність додаткових етапів роботи збільшує ймовірність помилки і отримання недостовірного результату.
Актуальність даної теми полягає в тому, що метод ПЛР орієнтований на попередження розповсюдження та ліквідацію інфекцій, діагностики спадкових, онкологічних та інших захворювань [12].
Предмет дослідження - онкомаркери, використовувані для діагностики онкологічних захворювань.
Метою даного дослідження є огляд та систематизація наукової та спеціальної літератури з методів ПЛР в діагностиці онкологічних захворювань.
Завдання дослідження:
Огляд і узагальнення наукової літератури про основні принципи ПЛР;
Систематизувати дані літератури про основні онкомаркерів в діагностиці методом ПЛР.
Провести аналіз даних літератури про перспективи застосування методу ПЛР в діагностиці онкологічних захворювань.
Глава 1. Сутність і принципи методу ПЛР
Метод ПЛР заснований на механізмі реплікації ДНК in vivo: дволанцюжкова ДНК (dsДHK) розкручується до одноланцюгових ДНК (ssДHK), дупліціруется і знову закручується. Ця методика складається з повторюваних циклів:
Денатурація ДНК шляхом плавлення при підвищеній температурі для перетворення дволанцюжкової ДНК в одноцепочечную ДНК
Відпал (гібридизація) двох олігонуклеотидів, використовуваних як праймерів для цільової ДНК
Подовження ланцюга ДНК, починаючи від праймерів, шляхом додавання нуклеотидів з використанням ДНК полімерази в якості каталізатора і в присутності іонів Мg2 +.
Гідність методу полягає в його універсальності: ПЛР дозволяє виявляти будь ДНК і РНК, навіть коли безсилі інші методи. Обладнання, що використовується для ПЛР, стандартно, воно не залежить від того, що саме і де саме ми шукаємо [8].
Наступний плюс - висока специфічність. У матеріалі, надісланому на дослідження, визначається унікальна послідовність нуклеотидів, характерна тільки для конкретного збудника. Таким чином, можна говорити, що специфічність методу досягає 100%. Крім того, це дозволяє одночасно, в одному і тому ж матеріалі, проводити пошук декількох збудників без якого-небудь збитку для якості відповіді [8,9].
. 1 Застосування методу ПЛР
Результатом відкриття ПЛР стало майже негайне практичне застосування методу. Перспективи практичного використання ПЛР-діагностики. В даний час найбільш швидко розвиваються п'ять основних напрямків генодиагностики:
діагностика інфекційних захворювань;
діагностика онкологічних захворювань;
діагностика лейкемій та лімфом;
діагностика раку грудей;
діагностика інших злоякісних захворювань;
діагностика генетичних захворювань;
ідентифікація особи;
судова медицина, криміналістика;
трансплантація органів і тканин;
визначення батьківства;
діагностика патогенів в їжі.
У медицині ПЛР застосовують при діагностиці інфекційних та спадкових захворювань (метод ПЛР дозволяє виявити єдину копію чужорідної ДНК у зразку), при діагностиці раку та імунних патологій. ПЛР використовують для ідентифікації особи і визначення біологічного споріднення індивідів [12].
Санітарно-епідеміологічні служби використовують ПЛР для контролю за мікробіологічними забрудненнями навколишнього середовища і продуктів харчування, а також для виявлення генетично модифікованих джерел їжі. У науково дослідних лабораторіях ПЛР використовують для вивчення нуклеїнових кислот і проведення маніпуляцій з ними [3].
. 2 Переваги і недоліки методу ПЛР
Процес ПЛР полягає у великому числі циклів синтезу (ампліфікації) специфічного фрагмента ДНК, накопиченні великої кількості копій, що потім можуть бути виявлені звичайним...
