нфікуванні вірусом генетично нечутливих до нього клітин;
- при зараженні чутливих клітин вірусом в необмежувальні умовах.
2. Продуктивний процес - реплікація (продукція) вірусів:
- загибель (Лізис) клітин (цитопатичної ефект) - результат інтенсивного розмноження та формування великої кількості вірусних частинок - характерний результат продуктивного процесу, викликаного вірусами з високою Цитопатогенні. Цитопатичної ефект дії на клітинні культури для багатьох вірусів носить досить впізнаваний специфічний характер;
- стабільне взаємодія , що не приводить до загибелі клітини (персистуючі та латентні інфекції) - так звана вірусна трансформація клітини.
3. Інтегративний процес - інтеграція вірусного генома з геномом клітини господаря. Це особливий варіант продуктивного процесу за типом стабільного взаємодії. Вірус реплицируется разом з геномом клітини господаря і може довго перебувати у латентному стані. Вбудовуватися в ДНК-геном господаря можуть тільки ДНК-віруси (Принцип "ДНК-в ДНК"). Єдині РНК-віруси, здатні інтегруватися в геном клітини господаря-ретровіруси, мають для цього спеціальний механізм. Особливість їх репродукції-синтез ДНК провируса на основі геномної РНК з допомогою ферменту зворотної транскриптази з наступним встраиванием ДНК в геном господаря.
Основні методи культивування вірусів.
1.В організмі лабораторних тварин.
2.В курячих ембріонах.
3.В клітинних культурах - основний метод.
Типи клітинних культур.
1. Первинні (Трипсінізірована) культури - фібробласти ембріона курки (ФЕК), людини (ФЕЧ), клітини нирки різних тварин і т.д. Первинні культури отримують з клітин різних тканин частіше шляхом їх роздрібнення і тріпсінізаціі, використовують одноразово, тобто постійно необхідно мати відповідні органи або тканини.
2. Лінії диплоїдних клітин придатні до повторного диспергуванню і зростанню, як правило не більше 20 пасажів (втрачають вихідні властивості).
3. Перещеплювані лінії (гетероплоідние культури), здатні до багаторазового диспергуванню і перевіванію, тобто до багаторазових пасажів, найбільш зручні у вірусологічній роботі-наприклад, лінії пухлинних клітин Hela, Hep та ін
Спеціальні поживні середовища для культур клітин.
Використовуються різноманітні синтетичні вірусологічні поживні середовища складного складу, що включають великий набір різних факторів росту-середу 199, Голка, розчин Хенкса, гідролізат лактальбуміну. У середовища додають стабілізатори рН (Hepes), різні у видовому відношенні сироватки крові (найбільш ефективною вважають ембріональну телячу сироватку), L-цистеїн і L-глютамін.
Залежно від функціонального використання середовища можуть бути ростові (з великим вмістом сироватки крові) - їх використовують для вирощування клітинних культур до внесення вірусних проб, і підтримують (з меншим вмістом сироватки або її відсутністю) - для утримання інфікованих вірусом клітинних культур.
Виявляються прояви вірусної інфекції клітинних культур.
1.Цітопатіческій ефект.
2.Виявлення тілець включень.
3. Виявлення вірусів методом флуоресцентних антитіл (МФА), електронною мікроскопією, авторадіографії.
4.Цветная проба. Звичайний колір використовуваних культуральних середовищ, що містять в якості індикатора рН феноловий червоний, при оптимальних для клітин умовах культивування (рН близько 7,2) - червоний. Розмноження клітин змінює рН і відповідно-колір середовища з червоного на жовтий за рахунок зміщення рН в кислу сторону. При розмноженні в клітинних культурах вірусів відбувається лізис клітин, зміни рН і кольору середовища не відбувається.
5.Виявленіе гемаглютиніну вірусів-гемадсорбції, гемаглютинація.
6.Методи бляшок (Бляшкоутворення). В результаті цитолитического дії багатьох вірусів на клітинні культури утворюються зони масової загибелі клітин. Виявляють бляшки- вірусні "клітинно-негативні" колонії.
Номенклатура вірусів.
Назва сімейства вірусів закінчується на "viridae", роду-"virus", для виду звичайно використовують спеціальні назви, наприклад - вірус краснухи, вірус імунодефіциту людини-ВІЛ, вірус парагрипу людини типу 1 і т.д.
Віруси бактерій (бактеріофаги).
Природною середовищем проживання фагів є бактеріальна клітина, тому фаги поширені повсюдно (наприклад, у стічних водах). Фагів притаманні біологічні особливості, властиві й іншим вірусам.
Найбільш морфологічно поширений тип фагів характеризується наявністю головки- ікосаедра, відростка (хвоста) зі спіральною симетрією (часто має порожнистий стрижень і скоротливий чохол), шипів і відростків (ниток), тобто зовні трохи нагадують сперматозоїд.
Взаємодія фагів з кліткою (бактерією) строго специфічно, тобто бактеріофаги...
