оли дослідник не має чистими стандартами і змушений відразу працювати із зразками, чистота яких викликає сумнів. Однак і в цих випадках краще провести очистку до ВЕРХ, використавши метод ТШХ або інший.
Встановивши на детекторі середню чутливість, слід по одному ввести в інжектор розчини всіх наявних і представляють інтерес чистих речовин (стандартів), фіксуючи кожен раз час виходу, форму піка, наявність домішок і всі відхилення від норми, які помічені. Якщо отримані результати близькі до тих, які отримані в методиці, взятої в літературі, порядок виходу піків той же і форма їх правильна, слід проаналізувати найбільш чисту з проб, з якими передбачається працювати. Якщо надалі передбачається працювати з забрудненими пробами, очищення яких утруднена або неможлива, потрібно захистити колонку від можливого забруднення і виходу з ладу шляхом установки після інжектора предколонкі. Слід враховувати, що предколонка, заповнена пеллікулярним матеріалом, має малу ємність по забруднень, тоді як заповнена мікрочастинками розміром 5 або 10 мкм-суттєво більшу. Установка предколонкі, заповненої мікрочастинками, змінює час утримування речовин проби, тому при її установці слід повторити введення чистих стандартів і ідентифікацію компонентів в пробі.
Якщо все речовини, які вас цікавлять, виходять досить швидко і з хорошим дозволом, можна переходити до калібрування по штучним сумішам і починати кількісну роботу. Якщо ж виходять не всі речовини, слід спробувати добитися їх елюювання, збільшивши силу розчинника. Корисно, якщо є можливість, для скорочення обсягу пошуку використовувати градієнт розчинника від слабкого до найбільш сильного. При цьому не слід забувати два положення: по-перше, колонка повинна бути промита від важких компонентів попередніх проб, аналізувалися ізократіческі, сильним розчинником, по-друге, завжди слід перевірити відсутність помилкових піків при градієнті, ввівши замість проби чистий розчинник. Якщо дослідник немає можливістю застосувати градієнт, слід використовувати метод пошуку від найсильнішої розчинника до слабкому.
При використанні для аналізу звернення-фазного варіанти роботи, подайте на колонку найбільш сильний розчинник, наприклад метанол, уравновесьте з ним колонку (і вимийте всі залишки від попередніх проб, що аналізувалися з більш слабким розчинником). Потім введіть пробу (ще краще, стандарт), найбільш важко елююють. Якщо компонент елююють занадто швидко (наприклад, з нульовим обсягом), значить, розчинник занадто сильний.
Уравновесьте колонку з більш слабким розчинником (наприклад, метанол - вода в співвідношенні 80:20) і повторити введення проби. Якщо результат той же, переходите послідовно до співвідношень 60:40, 40:60, 20:80 доти, поки не буде отримано поділ досить хороше з прийнятним часом елюювання всій проби (k 'останнього елююють компонента не повинно перевищувати 10). Якщо при цьому отримана селективність (поділ деяких компонентів) вас не задовольняє, можна випробувати систе...
