атами йде автоматично.
Підготовка зразків:
1) кров взяти за допомогою спеціальних капілярів (20 мкл);
2) змішати в пробірці з реактивом (1000мкл), перемішати, чи не струшувати сильно, щоб не утворилася піна (інакше кров гемолизируются);
3) пробірки завантажити в лоток (спочатку стандарт, потім досвідчені зразки).
У пробірці 20мкл крові і 1000мкл реагенту. p> Автоматична калібрування кожні 30 хв. Помилки при вимірах до 1,5%. Аналізатор зупиняється автоматично, якщо калібрування не береться або контрольні зразки виходять за встановлені межі.
2.2 Визначення креатиніну в крові на біохімічному аналізаторі ROKI
Принцип методу: швидкість утворення пофарбованого комплексу креатиніну з пікриновою кислотою в лужному середовищі пропорційна концентрації креатиніну в пробі.
Досліджуваний матеріал: сироватка або плазма крові. Гемолізовані сироватка або плазма крові для аналізу не придатна.
Склад набору:
Реагент № 1. Пікринова кислота (100 мл). p> Реагент № 2. Натрій їдкий (100мл). p> Калібратор - розчин креатиніну 17,7 ммоль/л (2мл).
Підготовка реагентів до процедури аналізу та їх стабільність:
Робочий реагент: для дослідження змішайте реагенти № 1 і № 2 у співвідношенні 1:1. нагрійте робочий реагент до температури 37 0 С.
Робочий розчин калібратора: для дослідження розведіть калібратор в 100 разів дистильованою водою. Отримана концентрація 177мкмоль/л. Процедура аналізу:
Аналіз проводиться в термостатіруемой (37 0 С) фотометричної кюветі з довжиною оптичного шляху 1см при 505нм проти повітря. У кюветі змішайте робочий реагент і досліджуваний матеріал або калібратор у співвідношенні 5:1 (наприклад, 1мл робочого реагенту і 0,2 мл досліджуваного матеріалу). Через 1 хвилину виміряйте оптичну щільність (Е 1 ). Повторіть вимірювання точно через 60сек (Е 2 ). Обчисліть величину ДЕ = Е 2 - Е 1 . p> Розрахунок концентрації креатиніну (С):
У сироватці (Плазмі)
;
ДЕ проби - Зміна оптичної щільності досліджуваної проби,
ДЕ калібр - зміна оптичної щільності калібрувальної проби,
177мкмоль/л - концентрація креатиніну в розведеному калібраторі,
Якщо концентрація креатиніну перевищує 880мкмоль/л у сироватці (плазмі) розведіть досліджувані зразки в 5 разів фізіологічним розчином і повторіть визначення; результат помножте на 5.
2.3 Визначення сечовини в крові на
біохімічному аналізаторі ROKI
Принцип методу: метод заснований на оптичному тесті Варбурга з використанням сполучених ферментативних реакцій, що призводять до утворення в інкубаційному середовищі НАД:
Сечовина + Н 2 Про в†ђ уреаза в†’ 2NH 3 + CO 2 ;
NH 3 + О±-кетоглутарат + НАДН 2 в†ђ глутаматдегідрогеназа в†’ L-глутамат + НАД + Н 2 О.
Швидкість окислення НАДН 2 у НАД пропорційна концентрації сечовини в пробі.
Досліджуваний матеріал: негемолізірованная сироватка або плазма крові.
Склад набору:
Реагент № 1: 0,05 М трис-буфер, рН 8,0 (60мл). p> Реагент № 2: Стабілізований розчин ферменту: уреаза - 8000Ед/л, глутаматдегідрогеназа - 700Ед/л (20мл). p> Реагент № 3: Стартовий реагент: НАДН 2 - 160мг/л (20мл). p> Калібратор: Розчин сечовини - 13,3 ммоль/л (800мг/л). p> Процедура аналізу:
I. Аналіз з використанням досліджуваного зразка в якості стартового реагенту. Робочий реагент: змішайте реагенти № 1,2,3 у співвідношенні 3:1:1. У кюветі фотометра з довжиною оптичного шляху 1см змішайте робочий реагент і досліджуваний зразок (або калібратор) у співвідношенні 100:1 і через 1хв виміряйте величину екстинкції за 340нм проти води (Е 1 ). Точно через 60сек повторіть вимірювання (Е 2 ). ДЕ = Е 1 - Е 2 . p> II. Аналіз з використанням НАДН 2 в якості стартового реагенту. Робочий реагент: змішайте реагенти № 1 і 2 у співвідношенні 3:1. У кюветі фотометра (1см) змішайте робочий реагент і досліджуваний зразок (або калібратор) у співвідношенні 80:1. Через 1хв додайте реагент № 3 в обсязі, що дорівнює Вј взятого об'єму робочого реагенту, перемішайте і через 1хв виміряйте величину екстинкції за 340нм проти води (Е 1 ). Точно через 60сек повторіть вимірювання (Е 2 ). ДЕ = Е 1 -Е 2 . p> Розрахунок концентрації (С) сечовини в досліджуваному зразку:
Сироватка:
або
.
2.4 Визначення білірубіну в крові на біохімічному аналізаторі ROKI
Принцип методу: прямий (зв'язаний, кон'югований з глюкуроновою кислотою) біліру...
