вним напрямком у діагностиці ГЕ ВРХ є застосування иммуноблотинга. p align="center">
иммуноблотинга (Western-blott) иммуноблотинга - різновид гетерогенного імунного аналізу.
Призначення:
1) ідентифікація білків, у тому числі вірусних антигенів;
) ідентифікація антитіл.
Метод використовується для діагностики губкообразной енцефалопатії (спонгіформними енцефалопатія, сказ корів) великої рогатої худоби. Існують різні виробники тест-систем, наприклад, тест-системи "Western-Blot" фірми "Prionix" (Швейцарія). Особливістю тест-системи "Western-Blot" є те, що для прояву реакції використовуються моноклональні антивидові антитіла, мічені лужною фосфатазою, а субстратної сумішшю є флуорохром, що взаємодіє з лужною фосфатазою, і в результаті реакції з'являється люмінесценція, виявляється за допомогою рентгенівської плівки.
Сутність. Метод заснований на комбінації гель-електрофорезу і реакції антиген-антитіло. Сутність його полягає в перенесенні молекул досліджуваної речовини з одного твердого носія, використовуваного для фракціонування біополімерів, на інший, де за допомогою імунохімічної реакції відбувається їх специфічне виявлення. Залежно від досліджуваної речовини розрізняють ДНК-, РНК - і білок-блотинг. Високий ступінь дозволу досягається за рахунок електрофоретичного розділення білків, Глік - і ліпопротеїнів і максимальної специфічністю детектуючих імунних сироваток або моноклональних антитіл. Заміна вищевказаних мічених антитіл на мічені антитіла пероксидазою дозволяє здешевити облік реакції і підвищити її чутливість і специфічність.
Основні етапи постановки.
Технічно імуноблотінг виконується в три прийоми:
імуноблотінг енцефалопатія рогата худоба
1) підлягають аналізу білки піддаються поділу в поліакриламідному гелі методом електрофорезу в присутності денатуруючих речовин: додецилсульфату натрію або сечовини. Цей процес часто позначають як SDS-PAGE, при якому розділені білки можуть візуалізуватися після фарбування і порівнюватися з еталонними зразками;
) розділені білки переносяться з гелю електрофоретично шляхом накладення (блотингу) на нітроцелюлозний фільтр, поміщений в спеціальну камеру, і фіксуються на ньому, в багатьох випадках, але не завжди при перенесенні зберігаються кількісні співвідношення білків;
) на фільтри наносяться детектуючі полі - або моноклональні антитіла, що містять радіоізотопну або ферментну мітку. На блотом наносять антитіла до специфічного антигену, відмивають і додають радіоактівномеченний кон'югат для визначення зв'язалися з антигеном антитіл. Для виявлення зв'язалися антитіл застосовують також антивидові мічену сироватку,...
