align="justify"> Трансформація - введення рекомбінантних плазмід в бактеріальні клітини, оброблені спеціальним чином - так, щоб вони на короткий час стали проникними для макромолекул. Однак плазміди проникають лише в частину оброблених бактерій. Трансформовані бактерії разом з плазмидой набувають стійкості до певного антибіотика. Це дозволяє їх відокремити від нетрансформованих бактерій, що гинуть на середовищі, що містить цей антибіотик. Для цього бактерії висівають на живильне середовище, попередньо розвівши так, щоб при розсіві клітини знаходилися на значній відстані один від одного. Кожна з трансформованих бактерій розмножується і утворює колонію з багатьох тисяч нащадків - клон.
. Скрінінг - відбір серед клонів тих бактерій, які несуть потрібний ген людини. Для цього всі бактеріальні колонії накривають спеціальним фільтром. Коли його знімають, на ньому залишається відбиток колоній, так як частина клітин з кожного клону прилипає до фільтру. Потім проводять молекулярну гібридизацію. Фільтри занурюють у розчин з радіоактивно міченим зондом. Зонд - це полинуклеотид комплементарної частини шуканого гена. Він гібридизується лише з тими рекомбінантними плазмідами, які містять потрібний ген. Після гібридизації на фільтр в темряві накладають рентгенівську фотоплівку і через кілька годин її виявляють. Положення засвічених ділянок на плівці дозволяє знайти серед безлічі клонів трансформованих бактерій ті, які мають плазміди з потрібним геном.
Не завжди вдається вирізати потрібний ген за допомогою рестриктаз. Тому в ряді випадків процес клонування починають з цілеспрямованого отримання потрібного гена. Для цього з клітин людини виділяють і-РНК, яка є транскрипционной копією цього гена, і за допомогою ферменту - зворотної транскриптази синтезують комплементарних їй ланцюг ДНК. Потім і-РНК, що служила матрицею при синтезі ДНК, знищується спеціальним ферментом, здатним гідролізувати ланцюг РНК, спарену з ланцюгом ДНК. Залишилося ланцюг ДНК служить матрицею для синтезу зворотного транскриптазою, комплетентарной другого ланцюга ДНК. p align="justify"> Отримана подвійна спіраль ДНК носить назву к-ДНК (комплементарна ДНК). Вона відповідає гену, з якого була лічена і-РНК, запущена в систему зі зворотним транскриптазою. Така до-ДНК вбудовується в плазміду, якій трансформують бактерії і отримують клони, що містять тільки вибрані гени людини. p align="justify"> Щоб здійснити перенесення генів, необхідно виконати наступні операції:
В· Виділення з клітин бактерій, тварин або рослин тих генів, які намічені для перенесення.
В· Створення спеціальних генетичних конструкцій, у складі яких намічені гени будуть впроваджуватися в геном іншого виду.
В· Впровадження генетичних конструкцій спочатку в клітку, а потім в геном іншого виду та вирощування змінених клітин в цілі організми.
2. Досягнення генної інженерії
генна інженерія біотехнологія спадковість
Тепер вміють вже синтезувати гени, і за допомогою таких синтезованих генів, введених в бактерії, отримують ряд речовин, зокрема гормони і інтерферон. Їх виробництво склало важливу галузь біотехнології. p align="justify"> Так, в 1980 році гормон росту - соматотропін - отримали з бактерії кишкової палички. До розвитку генної інженерії його виділяли з гіпофізів від трупів. Соматотропін, синтезований у спеціально сконструйованих клітинах бактерій, має очевидні переваги: ​​він доступний у великих кількостях, його препарати є біохімічно чистими і вільними від вірусних забруднень. p align="justify"> У 1982 році гормон інсулін почали отримувати в промислових масштабах з бактерій, що містять ген людського інсуліну. До цього часу інсулін виділяли з підшлункових залоз забиваються корів і свиней, що складно і дорого. p align="justify"> Інтерферон - білок, що синтезується організмом у відповідь на вірусну інфекцію, вивчають зараз як можливий засіб лікування раку та СНІДу. Знадобилися б тисячі літрів крові людини, щоб отримати таку кількість інтерферону, яке дає всього один літр бактеріальної культури. Ясно, що виграш від масового виробництва цієї речовини дуже великий. Дуже важливу роль відіграє також отримується на основі мікробіологічного синтезу інсулін, необхідний для лікування діабету. Методами генної інженерії вдалося створити і ряд вакцин, які випробовуються зараз для перевірки їхньої ефективності проти викликає СНІД вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ). p align="justify"> Ще один перспективний напрям у медицині, пов'язане з рекомбінантної ДНК, - генна терапія. У цих роботах, які поки ще не вийшли з експериментальної стадії, в організм для боротьби з пухлиною вводиться сконструйована за методом генної інженерії копія ге...
