Постановка досвіду
Брали наважку в 1 г цукрового драже кожного кольору і розчиняли в 100 мл дистильованої води (концентрація 1%). Готували друге концентрацію 0,2% (0,2 г на 100 мл води). Таким чином, вийшло шість пар розчинів різних кольорів, або 12 досвідчених варіантів.
Цибулини A. cepa поміщалися в стаканчики на 25 мл з розчинами драже. Всього було поставлено чотирнадцять варіантів дослідів, що розрізняються за типом (кольором) барвника і концентрації, включаючи два контрольних варіанти: контроль на дистильованої воді і на 1% розчині цукру в дистильованої воді, щоб перевірити дію цукру на кореневі меристеми A. cepa.
Для кожного варіанту використовували повторності відповідно до рекомендацій сучасного стандарту на проведення експериментів за методом Allium test (по три цибулини для кожного варіанту) [5]. Цибулини пророщували 4 дні. Потім у кожної цибулини коріння зрізали під основу донця.
1. Для оцінки токсичної дії визначали довжину коренів. Зміна довжини коренів у Allium test є показником токсичності досліджуваного фактора і використовується як короткострокового скринінгу-тесту [6]. Даний тест можна проводити в широкому діапазоні рН (3,5-11), в межах якого не спостерігається яких-небудь ефектів на зростанні кореневої системи A. cepa [6]. Вимірювали довжину кожного корінця. Визначалося середнє арифметичне (X) і помилка середнього (m) для варіанту досвіду. Після вимірів коріння фіксували в фіксаторі Кларка [2]. Для цитогенетичного аналізу готували препарати (по 9 препаратів на варіант досвіду) давлених кореневих меристем, згідно з методикою [2, 3].
2. Показником мітозмодіфіцірующего дії чинника є мітотичний індекс (MI,%) [2]. Він визначається як відношення числа діляться клітин до загального числа розглянутих на препараті клітин [2]. У ході даного аналізу на препаратах під мікроскопом переглядали близько 700-800 клітин. Серед них підраховували кількість клітин, які діляться, які перебували на різних стадіях мітозу, і числа не діляться клітин (Інтерфаз).
Щоб розкрити причини зміни мітотичної активності, аналізували тривалість кожної фази мітозу і визначали фазні індекси. Фазні індекси (ПІ,% - Профазі-ний індекс; МІ,% - метафазну; АІ,% - анафазного; ТІ,% - телофазний) визначаються як кількість клітин, які знаходяться на стадії профази, метафази і т. д., до загального кількістю проаналізованих мітозів [2]. Проводили порівняння часткою різних фаз в контрольному і дослідних варіантах.
3.Мутагенное дію визначали з використанням ана-телофазного аналізу [2], що дозволяє вивчати частоту мутацій шляхом урахування суми хромосомних аберацій (ХА) і відставань хромосом (отс.) на стадіях анафази і телофази до загальної суми ана-телофазу на препараті (Еотс. + ХА,%) [2]. Хромосомні аберації - порушення структури хромосом - включають мости і фрагменти, які є наслідком делеций і транслокаций. Відставання хромосом пов'язані з пошкодженням веретена поділу або з порушенням поведінки хромосом на веретені поділу [2].
Ступінь мутагенного ефекту оцінювали за ВМЕ (виразності мутагенного ефекту) [2]. ВМЕ визначається як кратність перевищення відсотка індукованих мутацій над контрольним значенням (спонтанним рівнем) і виражається в балах. Бали ВМЕ ранжирували за рівнями мутагенного ефекту і класифікували як сильний, середній, слабкий або відсутність [2].
Статистичну обробку результатів проводили за...
