торюють ще три рази, додаючи щоразу по 20 см 3 хлороформу. Хлороформ відганяють, залишок у колбі розчиняють у 5 см3 10%-ного розчину сірчаної кислоти і профільтровивают через маленький паперовий фільтр у мірну колбу місткістю 50 см 3.
Колбу із залишком кофеїну промивають ще три рази 5 см3 10%-ного розчину сірчаної кислоти, зливаючи розчин через той же фільтр в одну і ту ж колбу. Потім додають у колбу 25 см 3 0,1 н. розчину йоду, вміст колби доливають до мітки дистильованою водою при температурі 20 ° С, добре перемішують і залишають у прохолодному місці на 20 ... 30 хв до повного осадження періодіда.
йодний розчин обережно фільтрують через невеликий шматочок вати в суху колбу місткістю 100 см 3, причому перші порції фільтрату відкидають, так як фільтрат повинен бути прозорим.
Відбирають піпеткою 25 см 3 фільтрату і титрують 0,1 н. розчином тіосульфату натрію.
Вміст кофеїну (Д,%) встановлюють за формулою
Д=(1),
де: а - кількість 0,1 н. розчину йоду, взяте для випробування, см3;
b - кількість 0,1 н. розчину тіосульфату натрію, витраченого на титрування надлишку йоду, см3;
, 00485 - кількість кофеїну, відповідне 1 см3 0,1 н. розчину йоду, г;
m - маса наважки абсолютно сухого чаю, м.
За результат аналізу приймають середнє арифметичне значення двох паралельних визначень, розбіжність між якими не повинна перевищувати 0,5% при Р=0,95.
Якщо результат аналізу приблизно дорівнює значенню норми вмісту кофеїну для відповідного виду чаю, то необхідно проведення двох додаткових визначень. У цьому випадок за результат аналізу приймають середнє арифметичне двох паралельних визначень, розбіжність між якими не повинна перевищувати 0,7% при Р=0,95.
Фотометричний метод визначення кофеїну
Методика заснована на фотометричному визначенні масової частки кофеїну в розчині, отриманому після екстрагування кофеїну з продукту органічним розчинником з наступним гідролітичним окисленням кофеїну в тетраметил-пурпурову кислоту. Метод застосуємо при вмісті кофеїну в розчині від 10 до 30 мкг / см - 5.
Наважку масою 2 г поміщають в склянку, заливають 100 см3 киплячої дистильованої води і кип'ятять 5 хв. Отриману суспензію охолоджують до 18-20 ° С, кількісно переносять у мірну колбу місткістю 100 см3 і доливають дистильованою водою до позначки. Вміст колби збовтують і відстоюють 2-3 хв, потім фільтрують. Отриманий фільтрат використовують для аналізу. У ділильну воронку місткістю 25 cм3 послідовно вносять 10-15 см3 хлороформу, 2 см3 фільтрату і 0,5 см3 розчину гідроксиду калію. Закривають воронку притертою пробкою і проводять екстракцію, обережно багаторазово перевертаючи вміст воронки протягом 1 хв. Після розшаровування системи нижній, хлороформний шар обережно переносять у випарювальну чашку. Хлороформ відганяють на водяній бані насухо. До сухого залишку, який містить кофеїн, додають послідовно 1,0 см3 розчину соляної кислоти, змиваючи залишок на дно чашки, і 0,2 см3 розчину пероксиду водню. Вміст чашки перемішують обертальнимрухом, витримують 20 хв при кімнатній температурі, потім нагрівають на киплячій водяній бані до отримання сухого пофарбованого залишку ТМПК. Для приготування водного розчину ТМПК до сухого залишку, охолодженого до кімнатної температури, в чашку...
