тезу антигену F41 клітинами E coli ВГНКИ 397А/37-14 є величина рН, концентрації глюкози та неорганічного фосфату. Таку інформацію було практично неможливо знайти в серіях однофакторних експериментів, тому що тільки в експериментах першої серії за планом таб.5 у № № 1-4 ВП відрізнявся від 0. Оскільки ВП - синтез значущого антигену - визначали напівкількісної, в крапельної реакції аглютинації зі специфічною антисироваткою на межі чутливості, то в силу низької точності вимірювання застосовувати поліноміальну модель було недоцільно, що детально розглянуто вище. p align="justify"> Крім цього, наявність практично однакового ВП в перших 4 х експериментах і ВП = 0 в інших (ступеневу розподілення залежності ВП від № експерименту, кусково-безперервний зв'язок ВП = F (№ е.)), робить неможливим застосування результатів для розрахунку коефіцієнтів поліноміальної моделі. Побудова кореляційної таблиці і застосування серіального критерію дозволяє наочно виділити групу сильнодіючих факторів, встановити зв'язок між явищами, оцінити надійність зроблених висновків і обгрунтовано спланувати наступну серію експериментів. Після проведення додаткових серій багатофакторних і однофакторних експериментів з меншою кількістю підозрюваних факторів була сконструйована щільна живильне середовище на основі кислотного гідролізату казеїну і дріжджового екстракту з таким співвідношенням фосфату і глюкози при рН 8.0. Розроблена середу дозволила значно збільшити синтез діагностично значимого антигену F41 клітинами Е.соli ВГНКИ 397A/37-14 при невеликому зниженні врожаю біомаси, вирощеної на чашці. Глибинне культивування на основі знайденої комбінації умов було невдалим для синтезу зазначеного антигену.
Як приклад наводимо такі цифри - при імунізації 8 кроликів живою культурою, вирощеної на середовищі Мінка тільки від однієї тварини була отримана антисироватки, яка давала реакцію аглютинації з оцінкою (+) без розведення антисироватки. Імунізація вбитою культурою, вирощеної на розробленій середовищі, дозволила отримати від гіршого тваринного антисироватки, що дає аглютинацію з оцінкою (3 +) у розведенні 1/10, від кращого в розведенні 1/30, всього було використано 7 кроликів. Оцінка (3 +) - злипання бактеріальних клітин протягом 1 хв. в стійкі до перемішування конгломерати різної величини. Допускається наявність невеликого кількості не злиплих клітин. p align="justify"> При перегляді в електронному мікроскопі (негативний контраст, фіксація фосфорно-вольфрамової кислотою) спостерігали класичні фимбрии, на відміну від клітин, вирощених на середовищі Мінка. Підвищення якості аглютинації до рівня (4 +) було ускладнено нестабільністю експресії ознаки F41 при вирощуванні продуцента на розробленій середовищі. Клонування ознаки F41 не привело до отримання більш стабільного та активного продуцента. Отримані результати були визнані патентоспроможними/8 /. p align="justify"> Оскільки ВП вимірювали з високою помилкою через відсутність більш точних методів, то отримані результати не стільки служили для кількісних розрахунків, скільки сприяли експериментальному знаходженню області, близької до оптимальної. Такий підхід легко заперечити і важко обгрунтувати, але в даному випадку він спрацював. p align="justify"> Застосування вбитої культури для ін'єкцій кроликів підвищує вихід тварин, витримали курс гіперіммунізаціі (1,5 місяця). При інактивації культури відбувається часткова інактивація антигенів, тому таку процедуру можна проводити тільки з клітинами, які містять багато потрібного антигену в своєму складі. p align="justify"> Надалі була сконструйована щільна живильне середовище на основі пептону (7 -12-г/л) з лактозою (2 - .4 - г/л) при рН 8,0. Кількість додається фосфату (3 -10 г/л) залежить від партії пептону та вмісту в ньому неорганічного фосфату. Заміна глюкози на лактозу підвищує як селективність середовища для зростання лактозопозитивних кишкових паличок, так і технологічність, тому що лактоза не утворює токсичних сполук з азотовмісними компонентами при автоклавуванні у складі готової середовища в режимах до 1 атм., 30 хв.
При наявності хорошої партії пептону, що не всіяні спороутворюючими мікробами, досить прокип'ятити 5-10 хв. готову середу і відразу використовувати. Навіть у випадку низької обсіменіння досить прокип'ятити готову середу двічі протягом дня. Це дуже практично при роботі з швидко зростаючими штамами, що не підлягають тривалому зберіганню і подальшому використанню після вимірювання потрібних біохімічних або імунохімічних властивостей. p align="justify"> Отримані в подальшому результати з використанням розробленої середовища та наявності високотітражной специфічної антисироватки/8,20/свідчать, що відсутність в середовищі вуглеводів повністю вимикає синтез антигену F41. Такі клітини можна використовувати при фракціонування полівалентної сироватки для видалення сторонніх антигенів в якості ...
