g=0>
Сайт розпізнавання
I-PpoI
Послідовності pBR322
p> Рис.15. Здійснення делеції ділянки клонованого фрагмента. Вгорі: схема клонованого фрагмента гена jmj (довжина фрагмента 110kb). Білі прямокутники, екзони. Внизу: делеція ділянки довжиною 24 kb шляхом гомологичной рекомбінації по двом LPS (внутрішній ділянку вставки і ділянка послідовності pBR322).
Отримані результати показують, що в геномном векторі можна клонувати ДНК практично будь типу. Приготування двох фланкуючих сегментів перед створенням BGM неминуче, однак дозволяє здійснювати позиційне клонування молекул ДНК розмірами, що перевищують ліміт технології ПЛР. Клонування за допомогою геномного вектора має кілька переваг порівняно з клонуванням за допомогою плазмідних векторів. Процес клонування в плазмідних векторах сильно залежить від рестріцірующіх ендонуклеаз і наявності певних сайтів рестрикції. Крім того, при використанні таких векторів неможливі подальші маніпуляція з клонованої вставкою. Клонована в геномном векторі ДНК не відрізняється від решти геномної ДНК в відношенні її здатності брати участь у процесах рекомбінації. Це дозволяє проводити з нею різні маніпуляції: вставки, делеції, заміщення і додавання примикають сегментів. Крім того, одним з переваг є можливість зберігання клонованої ДНК при кімнатній температурі в суперечках B. subtilis .
ВИСНОВОК
До справжнього моменту для B . subtilis розроблено велику кількість як безпосередньо клонирующих векторів, так і спеціалізованих векторів: для клонування промоторів і термінаторів, для експресії, отримання гібридних білків, векторів з регульованою копійних і векторів для здійснення спрямованої інактивації генів. p> У основі векторів для B . subtilis лежать плазмідні релікони, виділені з близькоспоріднених організмів, таких як Bacillus thuringiensis, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus або Lactococcus lactis.
Більшість із зазначених векторів можуть бути також використані для ряду інших грампозитивних бактерій, тому що реплікони, на основі яких вони побудовані, часто можуть забезпечувати реплікацію і підтримка векторів у клітинах бактерій належать до кількох близьким видам і навіть родів.
.
В
ЛІТЕРАТУРА
1. Сільськогосподарська біотехнологія: векторні системи молекулярного клонування/За ред. В.І.Негрука. - М.: Агропромиздат, 1991. - 534 с. p> 2. Ballester S., Lopez P., Espinosa M., Alonso J.C, Lacks S.A. Plasmid structural instability associated with pC194 replication functions// J.Bacteriol. - 1989. - V.171. - P. 2...
