льованої води і фільтрують через паперовий фільтр. p> Препарат покривають смужкою фільтрувального паперу і заливають її 1% розчином крісталлвіолета на 1 хвилину. Стежать, щоб між фільтрувальної папером і склом не було бульбашок повітря, їх видаляють, придавлюючи смужку змоченою крісталлвіолетом фільтрувального паперу скляною паличкою. Через 1 хвилину папір знімають, препарат промивають водопровідною водою і заливають розчином Люголя, який витримують протягом декількох секунд до почорніння мазка. Потім залишок люголевскім розчину змивають і приступають до знебарвлення препарату в 96% етиловому спирті. Знебарвлення проводять під контролем очі, по черзі занурюючи і виймаючи препарат із спирту, що знаходиться в стаканчику. Знебарвлюють препарат доти, поки з його тонких ділянок перестануть стікати фіолетові цівки барвника і вони стануть блідо-сірого кольору. Препарат швидко промивають під струменем водопровідної води, а потім дофарбовують протягом 3 хвилин 1% водним розчином нейтрального червоного. Препарат ретельно промивають, поки струмінь води, що стікає з нього, не стане прозорою, висушують і мікроскопіруют. При правильному фарбуванні препарат оранжево-червоного кольору на тонких ділянках, лілово-фіолетового на товстих. Ядра клітинних елементів (Лейкоцитів, епітеліальних клітин) частково утримують основну фіолетову забарвлення, тобто в центрі вони повинні бути пофарбовані у фіолетовий колір, по периферії в оранжево-червоний. Висока якість забарвлення забезпечується своєчасним припиненням знебарвлення препарату.
Піхвові трихомонади фарбуються блідо - оболонка у вигляді тонкої смужки оточує сітчасту протоплазму оранжево-червоного кольору, ядро ​​бузкового або фіолетового кольору, джгутики і ундулірующая мембрана не проглядається. Позитивна відповідь потрібно давати при виявленні тільки типових форм вагінальних трихомонад. При виявленні змінених (округлі, нетипово-пофарбовані та ін), але схожих на вагінальних трихомонад найпростіших, треба досліджувати повторно взятий матеріал або зробити посів на живильні середовища.
Мікроскопія забарвлених препаратів є простим, дешевим і доступним методом, що не вимагають негайного проведення дослідження та спеціального обладнання. Однак він має низьку чутливість і специфічність.
Культуральний метод
Культуральний метод найбільш чутливий і специфічний. Вагінальні трихомонади дають хороше зростання на штучних поживних середовищах за умови дотримання правил паркану матеріалу для дослідження та його культивування. Живильні середовища повинні містити антибіотики для придушення росту супутньої мікрофлори. Вагінальні трихомонади - факультативні анаероби. Оптимум їх зростання в слабокислою середовищі при середньому рН 5.8 - 6.3 та +37 В° С, тому перед посівом культуральну середу слід прогріти, якщо вона зберігалася в холодильнику. Слід уникати перегріву культури вище 37-38 В° С, тому що підвищення температури вагінальні трихомонади переносять гірше, ніж зниження. Матеріал для дослідження з вогнищ ураження слід брати стерильним зондом або бактеріальної петлею. Матеріалом для дослідження можуть служити центрифугат змивів стерильним фізіологічним розчином, які вносять в культуральну середу стерильною пастерівської піпеткою. Стерильною пастерівської піпеткою слід користуватися при пересіві виділених штамів.
При вирощуванні на рідких поживних середовищах вагінальні трихомонади дають придонний ріст у вигляді щільного білуватого осаду, з якого пастерівської піпеткою беруть матеріал для дослідження в нативному препараті. Мікроскопічне дослідження культур та ідентифікацію слід проводити на 3 - 5-й день, при негативних результати на 7 - 9-й і на 11 - 17-й день після посіву, тому що тривалість циклу розвитку вагінальних трихомонад в культурі залежить від величини посівної зони. З придонного зростання готують нативний препарат одним з описаних вище способів і мікроскопують з об'єктивом 40 або 90, окуляр 7 або 10. Вагінальні трихомонади в полі зору можуть бути поодинокими або великими скупченнями, активно рухомі, при цьому добре проглядається рух джгутиків і ундулирующей мембрани. Можливо визначати вагінальні трихомонади в культурі методом РНІФ (реакція непрямої імунофлюоресценції).
Культуральний метод тривалий за часом, вимагає дорогих середовищ.
Імунологічний метод
Імунологічний метод дозволяє визначити специфічний поверхневий антиген піхвової трихомонади реакцією непрямої імунофлюоресценції (РНІФ) за допомогою набору "ТріхоСлайд". Матеріалом для дослідження служать мазки-відбитки з вогнищ ураження, які наносять на чисте знежирене предметне деколірованное (зі спеціальною лункою) скло стерильними одноразовими зондами, мають ватний тампон з підвищеними сорбційними властивостями. При нанесенні матеріалу тампоном багаторазово торкаються поверхні предметного скла. Після висихання на повітрі препарат фіксують 5 хвилин 96% етиловим спиртом або ацетоном (наносять на препарат кілька крапель безв...
