На малюнку 14 представлена ??залежність виходу продукту реакції креатиніну від концетрации креатину в розчині.
Таблиця 9 - Залежність виходу продукту реакції креатиніну від концентрації креатину в розчині
С (креатину)? 105, моль/дм3? , %0,28290,08993,70,42430,13692,40,56570,18090,70,70720,21589,20,84860,24787,40,990,28086,21,13150,32585,41,27290,37284,31,41440,40683,61,690,53182,21,980,56581,22,260,62880,22,540,73479,42,8280,78078,34,2431,13172,8
Малюнок 14 - Залежність виходу продукту реакції креатиніну від концентрації креатину в розчині
Із збільшенням концентрації креатину вихід продукту реакції зменшується.
2.7 Визначення градуювальної залежності креатину
В мірні колби місткістю 25,0 см3 поміщають 0,10; 0,20; 0,30; 0,40; 0,50; 0,60; 0,70; 0,80; 0,90; 1,00; 1,50 см3 робочого розчину креатину з концентрацією 7, 072? 10-4 моль/дм3.
Доливають 1,50 см3 розчину пікринової кислоти з концентрацією 0,05 моль/дм3. Поміщають на водяну баню на 2,5 години, температура води (96 ± 2)? С.
Далі проби охолоджують у крижаній воді, доливають 0,12 см3 розчину гідроксиду натрію з концентрацією 2,455 моль/дм3, витримують 11 хвилин при кімнатній температурі.
Розчин доводять до мітки дистильованою водою.
Вимірюють оптичну щільність при?=510 нм.
Як розчин порівняння використовують дистильовану воду (таблиця 10).
Таблиця 10 - Залежність абсорбційна від концентрації креатину
С (креатину)? 105, моль/дм3А0,28290,0890,42430,1360,56570,1800,70720,2150,84860,2470,99000,2801,13150,3251,27290,3721,41440,4061,69000,5311,98000,5652,26000,6282,54000,7342,82800,7804,24301,131
За отриманими даними будують градуйований графік залежності
А=f (C)
де С - концентрація креатину (малюнок 15).
Малюнок 15 - Градуювальна залежність оптичної щільності від концентрації креатину
2.8 Вибір депротеінізірующего агента
При виборі депротеінізірующего агента використан такі екстрагенти, як насичений розчин пікринової кислоти, розчин хлороводневої кислоти з концентрацією 0,1 моль/дм3 і дистильована вода. При використанні насиченого розчину пікринової кислоти відбувається сильна коогуляція білків і більш повне вилучення креатину.
Насичений розчин пікринової кислоти обраний для осадження білків в пробах м'яса [22].
2.9 Збільшення селективності реакції утворення креатинін-пікратний комплексу
Для поліпшення селективності реакцію утворення креатинін-пікратний комплексу проводять спочатку в лужному середовищі, де утворюється пікрати креатиніну, пофарбований у помаранчевий колір, потім створюють кисле середовище, відбувається руйнування креатинін-пікратний комплексу, при цьому комплекси пікринової кислоти з іншими речовинами забарвлення зберігають. Вміст креатиніну визначають по різниці аналітичних сигналів розчину проби в кислому і лужному середовищі [23].
При додаванні 0,65 см3 хлороводневої кислоти з концен...
