исутності 2.4 нМ TFPI преінкубіровалі з фактором Xa в концентрації: 1) 0, 2) 0.25, 3) 0.5 і 4) 1 нМ. Теоретичні криві проведені шляхом чисельного інтегрування системи (69-78). Значення констант = 10 нМ-1 хв-1, = 0 хв-1. Всі інші константи відповідають Таблиці 2. Експериментальні дані взяті з Fig 2 роботи [18]
Розбіжність можна зняти, доповнивши гіпотезу Baugh et al припущенням, що існує взаємодія Xa-TFPI з фермент-субстратним комплексом X-VIIa-TF або фермент-продуктно Xa-VIIa-TF. Враховуючи ймовірне сильне подібність між цими комплексами, можна припустити, що Xa-TFPI взаємодіє з обома. З Рис. 5В, що ілюструє нашу гіпотезу, видно, що якщо комплекс продукту з інгібітором (але не сам інгібітор) витісняє субстрат з ферменту, то це може або приводити до виникнення проміжного інгібіторного комплексу, такого ж, як той, що виникає при зв'язуванні інгібітора з фермент- продуктно комплексом в гіпотезі Baugh et al, або реакція може відразу йти в кінцевий інгібіторний комплекс. Модель показує, що введення взаємодії Xa-TFPI з фермент-субстратним або фермент-продуктно комплексами може описати експеримент (Рис 5А, Б). Найбільш вірогідний варіант інгібування фермент-субстратного комплексу в силу більш реалістичних значень одержуваних констант. Слід зазначити, що через малу швидкість збірки комплексу Xa-TFPI можна очікувати, що роль цієї реакції при фізіологічних умовах менше, ніж реакції інгібування Xa-VIIa-TF за участю TFPI. Це підтверджується результатами моделювання систем очищених білків, які імітують систему згортання (Мал. 9). br/>В В
Рис. 8 Теоретичне опис експерименту з ингибированию активації фактора X за допомогою гіпотези про зв'язуванні X-VIIa-TF c Xa-TFPI. Панель А, криві активації 170 нМ фактора X комплексом VIIa-TF (1024, 512, 384, 256, 192, 128, 64, 32 пМ зверху вниз) у присутності 2.4 нМ TFPI. панель Б, криві активації 170 нМ фактора X комплексом 128 пМ VIIa-TF у присутності 2.4 нМ TFPI преінкубіровалі з фактором Xa (0, 0.25, 0.5, 1 нМ зверху вниз). Теоретичні криві проведені шляхом чисельного інтегрування системи (69-78). Всі константи відповідають Таблиці 2. Експериментальні дані взяті з Fig 2 роботи [18]
В В
Рис. 9. Перевірка гіпотез механізму дії TFPI. Панель А, перевірка гіпотези про інгібуванні фермент-субстратного комплексу за участю TFPI. Проводилося інгібування фактора Xa у присутності і під час відсутності VIIa-TF. Концентрації реагентів: Xa = 1 Нm, TFPI = 1 Нm, VIIa-TF = 0 або 5 Нm. Зверху вниз: крива в відсутність VIIa-TF; крива з VIIa-TF, якщо реакції немає; крива з VIIa-TF, якщо реакція є. Всі константи відповідають Таблиці 2. Панель Б, перевірка гіпотези про інгібуванні фермент-продуктного комплексу за участю Xa-TFPI. Проводилося інгібування VIIa-TF комплексом TFPI-Xa у присутності і під час відсутності Xa. Концентрації реагентів: TF = 1 Нm, TFPI-Xa = 1 Нm, Xa = 0 або 100 Нm. Зверху вниз: крива в відсутність Xa; крива з Xa, якщо реакції немає; крива з Xa, якщо...
