ла додана наступним способом. Ми вважали, що Xa-TFPI взаємодіє з фермент-субстратним комплексом X-VIIa-TF, витісняючи субстрат, фактор Х, і утворюючи проміжний інгібіторний комплекс TFPI-Xa-VIIa-TF. Попередні розрахунки показали, що константи,, і практично не впливають на кінетику системи. Тому ми поклали їх рівними нулю і доданки, що відповідають цим реакцій, в систему рівнянь не включені. p> Результати дослідження моделі
На Рис. 5 ми спробували схематично представити можливі молекулярні взаємодії між усіма учасниками процесу. На панелі А зображено процес активації фактора X з урахуванням стадій фермент-субстратного і фермент-продуктного комплексів, а також загальноприйнятий двох кроковий механізм інгібування реакції активації. У фінальному ІНГІБІТОРНИХ комплексі фермент Е пов'язаний з першим Кюнітц-доменом інгібітора, а продукт реакції Р - з другим. Двох крокова схема Рис. 5А передбачає послідовне зв'язування спочатку продукту з інгібітором, а потім продукт-інгібіторного комплексу з ферментом. Доповнення цієї схеми відповідно до гіпотезою Baugh et al (Мал. 5Б) призводить до необхідності внутрімолекулярної перебудови інгібіторного комплексу. Як видно з Рис. 5B, зв'язування інгібітора з фермент-продуктно комплексом повинне спочатку приводити до виникнення проміжного комплекс (EPI), в якому продукт, пов'язаний з ферментом, пов'язаний також з другим доменом інгібітору. Після внутрімолекулярної перебудови виникає остаточний інгібіторний комплекс, в якому фермент вже пов'язаний з першим доменом інгібітору. Природно припустити, що третій Кюнітц-домен TFPI інгібітора утворює шарнір, який дозволяє провести внутрішньомолекулярну перебудову інгібіторного комплексу без дисоціації. Не виключено, що третій домен бере участь не тільки у взаємодії з ферментом, але також і з поверхневими структурами клітинної мембрани, з якими пов'язаний фермент. br/>В В
Рис. 6. Схема реакцій шляху TFPI. Панель А, активація фактора X комплексом VIIa-TF і інгібування активації по двокрокового шляху. Панель Б, механізм інгібування, запропонований в роботі [18]. Панель В, додатковий шлях інгібування фермент-субстратного комплексу комплексом Xa-TFPI. Позначення: S, фактор X; E, VIIa-TF; P, фактор Xa; I, TFPI. br/>
Математичне моделювання показало, що гіпотеза Baugh et al дозволяє описати ряд експериментальних даних (Мал. 6А), які неможливо було описати за допомогою двох крокова моделі. Проте, і ця гіпотеза описує не всі експериментальні дані, в першу чергу, експерименти з активації фактора X у присутності преформованими комплексу Xa-TFPI (Мал. 6Б). br/>В В
Рис. 7. Теоретичний опис експерименту з ингибированию активації фактора X за допомогою гіпотези про інгібуванні Xa-VIIa-TF за участю TFPI. Панель A, криві активації 170 нМ фактора X комплексом VIIa-TF (1024, 512, 384, 256, 192, 128, 64, 32 пМ зверху вниз), у присутності 2.4 нМ TFPI. Панель Б, криві активації 170 нМ фактора X комплексом 128 пМ VIIa-TF у пр...
