ення сплайсосома. Деякі додаткові білки використовують вивільнену енергію для руйнування існуючих РНК-РНК зв'язків і утворення нових.
АТФ-залежні РНК-РНК перетворення відбуваються як усередині snRNP, так і між snRNP і пре-мРНК субстратом. Одна з найважливіших їх функцій - створення активної каталітичної точки сплайсосома. Стратегія освіти активної точки тільки після об'єднання і перетворення сплайсосома - ефективний шлях запобігання помилок.
Каталітична точка формується з молекул РНК, а не білків. Завдяки цьому, деякі snRNA формують тривимірну структуру, яка зіставляє 5 - кінець пре-мРНК з розгалуженою інтронів послідовністю і виробляє перший трансетеріфікаціонную реакцію. Подібним чином третє 5 - сплайс-сайти з'єднуються разом, здійснюючи другий трансетеріфікаціонную реакцію.
Коли хімічний акт сплайсингу завершений, snRNP залишаються прикріпленими до Лариат. Їх відділення від нього і один від одного вимагає ще однієї серії РНК-РНК переходів і гідролізу АТФ. Це повертає snRNA в їх первинний стан, і вони можуть бути використані знову. Після закінчення сплайсингу сплайсосома направляє ряд протеїнів до мРНК біля місця, до якого був прикріплений інтрон. Формуючи Екзонно вузловий комплекс, ці білки позначають місце успішного акту сплайсингу і впливають на подальшу долю мРНК.
Інтрони послідовності сильно розрізняються за розміром. Якби вибір точок сплайсингу забезпечувався тільки дією snRNP, слід було б очікувати помилок, таких, як випадання екзонів або виникнення невірних сплайс-сайтів. Особливі механізми, вбудовані в сплайсосому, доповнюються двома додатковими стратегіями, які збільшують точність її роботи.
Перша - це послідовність ранніх стадій сплайсингу, які відбуваються ще при синтезі пре-мРНК. У процесі транскрипції фосфорілірованний хвіст РНК-полімерази несе компоненти сплайсосома, які переносяться точно від ферменту до РНК в процесі синтезу. Ця стратегія дозволяє зберегти чітке чергування інтронів і екзонів, оскільки snRNP, приєднуйся до 5 - сайту сплайсингу, спочатку представлена ??лише одним 3 - сайтом сплайсингу, в той час як інші такі точки нижче по ланцюгу ще не були синтезовані. Координація транскрипції і сплайсингу дуже важлива для запобігання небажаного випадання екзонів.
Стратегія, звана «уточнення екзонів», - ще один спосіб вибору вірних точок сплайсингу. Розмір екзона вважається набагато стандартизованим, ніж інтрони (150 пар нуклеотидів у багатьох еукаріот). Відповідно до цієї стратегії, механізм сплайсингу спочатку відшукує родинні і подібні за розміром кодують послідовності. При продовженні синтезу РНК, група додаткових компонентів (в основному, SR-білки) приєднується до Екзонно і відзначає 5 - і 3 - сайти сплайсингу починаючи з 5 - кінця РНК. Ці протеїни поповнюють snRNA U1, яка відзначає кордону екзона, і U2AF, яка уточнює вищерозміщені. Відзначаючи Екзони і користуючись перевагою їх однакового розміру, клітина збільшує точність привнесення початкових сплайс-компонентів виникаючої РНК і тим самим дозволяє уникнути появи невірних місць сплайсингу. Як конкретно SR-білки відрізняють Екзонно послідовності від інтронних, поки детально невідомо. Однак виявлено, що ці білки прикріплюються переважно до особливих РНК в екзонах.
Так як кілька різних кодонів можуть кодувати певну амінокислоту, мається свобода модифікації Екзонно послідовності таким чином, щоб сформувати прикріпного точку для SR-білків без необхідності впливу на амінокислотну послідовність, яка нею визначається.
І мічення кордонів екзонів і інтронів, і з'єднання сплайсосома починається на молекулі РНК, коли вона ще подовжується за допомогою РНК-полімерази на 3 - кінці. Проте справжній хімізм сплайсингу може починатися набагато пізніше. Це означає, що інтрони не обов'язково вирізаються з молекули пре-мРНК в тому ж порядку, в якому вони розташовуються в ланцюзі. (Alberts B. et al, 2007)
Малюнок 2.2 Інші можливості сплайсингу
2.2 Альтернативний сплайсинг
Механізми альтернативного сплайсингу
Існує кілька механізмів альтернативного сплайсингу:
1. Пропуск екзона.
Кодирующая послідовність може вирізатися з первинного транскрипту.
2. Взаємовиключні Екзони.
З двох екзонів в кінцевому транскрипті зберігається тільки один.
3. Використання альтернативного донорного сайту.
Може виникати кілька 5 -участков сплайсингу, які змінюють 3 -граніцу вишележащего екзона.
4. Використання альтернативного акцепторного сайту
Використовуються різні 3 -участкі сплайсингу (ак...
