я кроликів (феномен Пауля). Крім того, методами серологічних реакцій визначаються поява і наростання в крові у хворих віспою натуральної специфічних протівооспенного антитіл.
Взяття матеріалу від хворих. Кров береться в кількості 5 мл з ліктьової вени в стерилізовану пробірку з гумовою пробкою. Сироватка, звільнена 'від згустків, може бути використана для виділення вірусу, для виявлення антигену і для серологічних реакцій. У деяких випадках з згустку готується суспензія, також використовується для виділення вірусу.
У макулопапулезной стадії хвороби для виділення вірусу застосовується змив з глотки хворого, який виробляється ретельним прополіскуванням фізіологічним розчином.
З шкірних поразок папули, везикули, пустули, кірки береться матеріал як для мікроскопічних досліджень, так і для виділення вірусу. Для цієї мети поверхню віспини злегка змащується спиртом і після висушування проводиться зішкріб або проколювання тонкооттянутим капіляром пастерівської піпетки. Корки для дослідження відокремлюються пінцетом. Отриманий матеріал використовується для виділення вірусу і, крім того, наноситься на предметні скла (не менше двох). Мазки або відбитки висушуються на повітрі і фарбуються за Морозовим, Гутштейну або пашенной.
Якщо взятий матеріал не може бути негайно відправлений у лабораторію, він поміщається в простерилізовані ампули, які тут же запаюються. Всі лабораторні працівники, зайняті взяттям і обробкою матеріалу від хворих, повинні бути ревакциновані і строго дотримуватися обережності, оберігають проти зараження себе і оточуючих.
Мікроскопічні дослідження. Забарвлення за Гутштейну полягає в обробці мазків метілвіо-влітку і 2% розчином вуглекислого натрію в дистильованої воді після фіксації в метиловий спирт протягом 30 хв. Для фарбування по пашенной висушені на повітрі мазкн фіксують метиловим спиртом (10 хв.) і протруюють синькою Леффлера при нагріванні до появи парів, промивають дистильованою водою, забарвлюють карболовим фуксином Циля 3 хв., нагріваючи до появи парів, і знову промивають дистильованою водою. Потім препарати диференціюють абсолютним спиртом або 5% розчином таніну протягом 5 хв.
При дослідженні в імерсійною системі світлового мікроскопа частинки вірусу віспи натуральної (Тільця Пашена) виглядають у вигляді сферичних тілець, забарвлених за Морозовим в темно-коричневий колір, по Гутштейну - у світло-ліловий і по пашенной - у рожево-червоний.
Мікроскопічні дослідження найбільш результативні протягом папули-везикулярной фази хвороби і скрутні під час пустулезной фази, коли в препараті знаходяться не тільки тільця Пашена, а й різні артефакти. Виявлення тілець Пашена має безсумнівну діагностичну цінність, але не завжди дозволяє диференціювати віспу натуральну від генералізованої вакцини, коров'ячої віспи, вітрянки. Відсутність тілець Пашена при відповідних клінічних та епідеміологічних показниках не виключає ймовірність діагнозу віспи натуральної.
Серологічні реакції, застосовувані для виявлення антигену, і приготування іммуносивороткі. Для виявлення специфічного оспенного антигену може бути використана реакція зв'язування комплементу у звичайній прописи з урахуванням таких необхідних особливостей. В якості антигену використовується негемолізнрованная сироватка, попередньо інактивована при 1 В° 56 В° протягом 30 хв., або матеріал, взятий з шкірних поразок. Скоринки попередньо розтираються в ступці і розлучаються 1: 10 фізіологічним розчином.
Забруднене матеріал рекомендується обробляти ефіром з додаванням пеніциліну і стрептоміцину протягом 45 хв. В якості імунної сироватки використовується сироватка кроликів, попередньо імунізованих вірусом вакцини. Різні розведення антигену з коефіцієнтом 2 з'єднуються з іншими інгредієнтами реакції і инкубируются при 1 В° 4 В° протягом 12-16 год.
З тією ж метою може бути застосована методика виявлення оспенного антигену, заснована на принципі дифузії в агар, по Краулі. За рекомендацією С. С. Мареннікова реакція ставиться наступним чином. До розплавленого 1% агару, приготовленого на фосфатно-сольовому буфері рН = 7,2, додають мертіолят в кінцевій концентрації 1: 10 000 і наносять шари в 1 мм на предметне скло. У остившем агарі прорізають чотири круглих поглиблення 3 мм в діаметрі на відстані 5-6 мм. Поглиблення маркують відповідно призначенням. Одне поглиблення призначене для специфічної імунної сироватки, інше - для контрольної, нормальної, сироватки, третє - для випробуваного матеріалу і четверте - для відомої культури вірусу вакцини. Предметне скло з наповненими заглибленнями поміщають у вологу камеру і залишають на 4-24 години при 1 В° 20 В°.
Реакція вважається позитивною у разі появи смуги преципітації між заглибленнями з випробуваним матеріалом і специфічної іммуннойсивороткой при одночасному появі аналогічної смуги преципітації між тією ж сироваткою і відомим антигеном. При цьому смуги преципітації не повинно бути між ан...
