алібрувального графіка при методі ендрассіка.
Спосіб I - Шелонг-Вендес використанням стабілізуючого властивості білка сироватки крові. Основний розчин білірубіну: в колбі місткістю 50 мл розчиняють 40 мг білірубіну в 30-35 мол 0,1 моль/л розчину карбонату натрію Na 2 CO 3 . Добре збовтують, що не допускаючи утворення бульбашок. Доводять до 50 мл 0,1 моль/л розчином Nа 2 СО 3 і кілька разів перемішують. Розчин стійок тільки протягом 10 хв від початку приготування. Надалі відбувається окислення білірубіну. Робочий розчин білірубіну до 13,9 мл свіжої негемолізірованной сироватки здорової людини додають 2 мл свіжоприготованого основного розчину білірубіну і 0,1 мл 4 моль/л розчину оцтової кислоти. Добре перемішують. При цьому виділяються бульбашки вуглекислого газу. Робочий розчин стійок протягом декількох днів. Цей розчин містить точно на 100 мг/л, або 171 мкмоль/л, білірубіну більше, ніж сироватка, взята для приготування розчину. Щоб виключити при розрахунках кількість білірубіну, що міститься в цій сироватці, при вимірюванні на фотометрі з величин екстинкції калібрувальних проб віднімають величини екстинкції відповідних розведень компенсаційної рідини. Для приготування компенсаційної рідини змішують 13,9 мл тієї ж сироватки, яка використовувалася для приготування калібрувального розчину білірубіну, 2 мл 0,1 моль/л розчину карбонату натрію і 0,1 мл 4 моль/л розчину оцтової кислоти. Для побудови калібрувального графіка готують ряд розведень з різним вмістом білірубіну. До отриманих разведениям додають по 1,75 мл кофеїнового реактиву і по 0,25 мл діазосмесі. При появі помутніння можна додати по 3 краплі 30%-ного розчину їдкого натру. Вимірювання проводять при тих же умовах, що і в дослідних пробах, через 20 хв. З компенсаційної рідини готують розведення, аналогічні калібрувальним (як зазначено нижче), і далі обробляють їх так само, як калібрувальні проби.
В
Таблиця. Визначення пов'язаного білірубіну
№ пробірки
Робочий розчин білірубіну мл
Ізотонічний розчин NaCl, мл
Кількість білірубіну в пробі
Концентрація білірубіну в сироватці крові, мкмоль/л
мг
мкмоль
1
0,05
0,45
0,005
0,00855
17,1
2
0,1
0,4 ​​
0,01
0,0171
34,2
3
0,15
0...
