є біохімічний
метод Ендрассіка-Грофа . Він заснований на взаємодії білірубіну з диазотированного сульфаниловой кислотою з утворенням азопігменти. При цьому зв'язаний білірубін (Білірубін-глюкуронід) дає швидку (В«прямуВ») реакцію з діазореактивом, тоді як реакція вільного (не пов'язаного з глюкуронідом) білірубіну протікає значтельно повільніше. Для її прискорення застосовують різні речовини-акселератори, наприклад кофеїн (метод Ендрассіка-Клеггорна-Грофа), які звільняють білірубін з білкових комплексів (В«непрямаВ» реакція). У результаті взаємодії з диазотированного сульфаниловой кислотою білірубін утворює забарвлені сполуки. Вимірювання проводять на фотометрі. p> ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
У 3 пробірки (2 досвідчені проби і неодружена) вводять реактиви, як зазначено в таблиці. діазореакція
Інгредієнти
Досвідчена проба мл
Холоста проба мл
Загальний білірубін
Зв'язаний білірубін
Сироватка
0,5
0,5
0,5
Кофеїновий реактив
1,75
-
1,75
Розчин хлориду натрію
-
1,75
0,25
Діазосмесь
0,25
0,25
-
Для визначення зв'язаного білірубіну вимір проводять через 5-10 хв після додавання діазосмесі, так як при тривалому стоянні в реакцію вступає незв'язаний білірубін. Для визначення загального білірубіну пробу для розвитку забарвлення залишають стояти 20 хв, після чого вимірюють на фотометрі. При Надалі стоянні забарвлення не змінюється. Вимірювання проводять при довжині хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) в кюветі з товщиною шару в 0,5 см проти води. З показників, отриманих при вимірюванні загального та зв'язаного білірубіну, віднімають показник холостий проби. Розрахунок роблять за калібрувальним графіком. Знаходять вміст загального і пов'язаного білірубіна.Метод Ендрассіка, Клеггорна і Грофа простий, зручний в практиці, не пов'язаний із застосуванням дефіцитних реактивів і є найбільш прийнятним для практичних лабораторій.Определеніе рекомендується наводити відразу ж після забору проб, щоб уникнути окислення білірубіну на світлі. Гемоліз сироватки знижує кількість білірубіну пропорційно присутності гемоглобіну. Отже, сироватка крові не повинна бути гемолізовані.
Ряд речовин - гідрокортизон, андрогени, еритроміцин, глюкокортикоїди, фенобарбітал, аскорбінова кислота - викликають інтерференцію.
Постоеніе к...
