одою. Визначення не зовсім специфічно, интерферируют речовини з активною метиленової групою і деякі відновлюють речовини, наприклад глюкоза, ацетон, ацетоуксусная і піровиноградна кислоти.
Визначення креатиніну в сироватці крові за методом Поппера: 2 см3 сироватки змішують з 6 см3 насиченого розчину пікринової кислоти. Через 5 хвилин пробірку поміщають на 15-20 секунд в киплячу водяну баню, потім центрифугують. До 4 см3 центрифугата додають 0,2 см3 2,5 моль/дм3 розчину їдкого натру і ретельно змішують. Іноді після подщелачивания розчин мутніє внаслідок випадання фосфатів. У цьому випадку розчин ще раз центрифугують. Потім розчин доводять до об'єму 10 см3 водою. Через 10 хвилин (не пізніше 20 хвилин) вимірюють у кюветі з товщиною шару в 2 сантиметри при довжині хвилі 500-560 нм (зелений світлофільтр) проти холостий проби.
Холоста проба: 3 см3 насиченого розчину пікринової кислоти і 0,2 см3 2,5 моль / дм3 розчину їдкого натру доводять до обсягу 10 см3 водою.
Розрахунок роблять за калібрувальним графіком.
Зміст креатину визначають описаними вище колориметричною методами після його перекладу на креатинін при нагріванні в присутності соляної кислоти [2].
Реакція з пікратом - не єдина для визначення креатиніну. Запропоновано також метод перетворення креатиніну в метілгуанідін з наступним визначенням його в реакції Сакагучи, в якій метілгуанідін реагує з? - Нафтолом і хлоридом натрію у присутності диацетила з утворенням хромогену червоного кольору.
Визначення вільного креатину проводять в безбілковому розчині, використовуючи кольорову реакцію з діацетілом в присутності? - нафтола.
Креатин - стандартний розчин, що містить 0,5 мкмоль / мл.
М'язову тканину обережно зрізають по сухожилиям, уникаючи перерізання м'язових волокон, так як це призводить до скорочення м'язових клітин і збільшення вільного креатину. Розчин охолоджують, що випав в осад КС1О4 видаляють фільтруванням і в фільтраті визначають креатин.
Одночасно з досвідченими ставлять проби, що містять 0,1-0,5 мкмоль стандартного розчину креатину. Будують калібрувальний графік, визначають зміст креатину в дослідних пробах і в досліджуваної тканини, враховуючи вироблені розведення.
До 1 мл безбілкового розчину (отриманого, як при визначенні креатину) доливають 1,5 мл магнезіальній суміші, додають 1 краплю фенолфталеїну і проводять осадження неорганічного фосфату (с.
реакції трансфосфорілірованія і утворюють аналог комплексу перехідного стану (Е-Mg-АДФ-МОЗ ~-креатин) [<# «justify"> Ці методи не мають переваг перед пікратом, але знайшли застосування у відпрацюванні реакції на твердій фазі .
Найбільш надійним і чутливим є визначення креатину в біологічних рідинах спектрофотометричним методом з використанням креатинкінази в сполучених ферментних системах, а також метод, заснований на виявленні утворюється в лужному середовищі комплексу креатину з нінгідрином.
Проблеми, пов'язані з невисокою специфічністю реакції Яффе, спонукали до пошуку більш специфічних методів. Найбільший інтерес представляють ферментативні або частково ферментативні методи з використанням: (1) креатінінази (КФ 3.5.4.21), також званої креатінініміногідролазой або деіміназой, катализирующей розщеплен...
