ня креатиніну до іона амонію та N-метілгідантоіна і (2) креатінінгідролази (КФ 3.5.2.10), також званої креатінінамідогідролазой, катализирующей гідроліз креатиніну до креатину (малюнок 3).
Рисунок 3 - Реакції, що використовуються для визначення креатиніну за участю креатінініміногідролази
У частково ферментативних, ранніх варіантах автоматизованих і неавтоматизованих методів, використовували ці ферменти, або в поєднанні, або роздільно. Їх використовували для руйнування креатиніну та визначення різниці між загальною кількістю Яффі-реагуючих хромогенів (до додавання ферменту) і залишаються в середовищі «некреатінінових» Яффі-реагуючих хромогенів (після додавання ферменту). Дані методи дозволяють оцінити справжнє вміст креатиніну в матеріалі.
Для визначення креатиніну використовували иммобилизировать фермент креатініназу в поєднанні з іон-селективним електродом, чутливим до іонів амонію. Оскільки методи, засновані на даній реакції, чутливі як до ендогенного аміаку та креатиніну, так і до аміаку в навколишньому середовищі і реактивах, треба було введення додаткових реакцій, що дозволяють вивести з реакції іони амонію і підтримувати стабільний рівень коферменту НАДФН2.
Був запропонований повністю ферментативний метод, в якому креатинін гидролизуют до креатину, який визначають в креатінкіназной реакції (малюнок 4).
Малюнок 4 - Реакції, що використовуються для визначення креатиніну за допомогою креатинкінази і піруваткінази
Швидкість індикаторної реакції в даній сполученої системі ферментів контролюється спектрофотометрически при довжині хвилі 340 нм або в рівноважному, або кінетичному варіанті. Метод використовують як для неавтоматизированного визначення, так і для визначення за допомогою автоаналізаторів [4].
Для усунення впливу аміаку при визначенні креатиніну використовують методи з використанням креатінінамідогідролази для перетворення креатиніну в креатин. Креатин перетворюють на саркозин, який окислюється саркозіноксідазой до гліцину, формальдегіду і перекису водню (малюнок 5). Вміст перекису водню визначають кількісно в пероксидазною реакції, інтенсивність забарвлення середовища залежить від концентрації креатиніну в зразку [5-7].
Малюнок 5 - Реакції, що використовуються для визначення креатиніну за допомогою реакції Тріндера
Референтний метод для визначення креатиніну в сироватці включає массспектрометрію з ізотопним розведенням. У цьому методі застосовують іонообенную ВЕРХ з фотометрією при 234 нм [8].
Кількісне визначення креатиніну може бути проведено за допомогою високоефективної рідинної хроматографії [9].
Інші методи визначення креатиніну включають реакцію креатиніну з 3,5-динітробензойна кислотою (ДНБК) або її похідними [10], 1,4-нафтохінон - 2-сульфонат або o-нітробензальдегідом [11].
Реакція креатиніну з ДНБК була використана в технології «сухий» хімії. У цьому методі креатинін реагує з ДНБК з утворенням забарвленого комплексу. Реакція оцінюється за допомогою відбивної фотометрії при 560 нм [12].
При використанні більш специфічних (ферментативних) методів визначення креатиніну в плазмі результати зазвичай на 10-25 ммоль / л (0,1-0,3 мг/1...
