ня поділу потрібно на порядок менший обсяг рухомої фази.
. Дегазація розчинників. Розчинники, що застосовуються в хроматографії для приготування рухливих фаз, зазвичай містять розчинений повітря. Особливо багато повітря містить вода.
При роботі на недегазованих елюентом бульбашки повітря потрапляють в різні вузли рідинної системи: насос, колонку, капіляри, детектор. При попаданні повітря в рідинну систему на хроматограмі з'являються високі періодичні шуми, спричинені коливанням тиску в рідинної системі. Це призводить до різкого зменшення чутливості аналізу.
Для видалення повітря їх елюенту проводять його дегазацію. Як правило, дегазируют тільки елюентом для обернено-фазових розділень - оскільки водноорганіческіе суміші містять значні кількості розчиненого повітря. Особливо ретельно дегазація повинна здійснюватися у разі градієнтного елюювання, а також при застосуванні флуоріметріческого детектування.
В ході градиентного елюювання в обернено-фазовому режимі відбувається змішування двох елюентів - водноорганіческіх сумішей різного складу. Змішування недегазованих елюентів призводить до інтенсивного виділення розчиненого повітря, що критично для проведення визначення в цілому (на хроматограмі бульбашки повітря реєструються у вигляді різких «викидів» на нульової лінії).
Чутливість флуоріметріческого детектування зменшується при високому вмісті розчиненого повітря в рухомій фазі (відбувається гасіння флуоресценції). Таким чином, при застосуванні флуоріметріческого детектування дегазації елюенту повинна приділятися особлива увага.
Існує три основних способи дегазації рухливих фаз для рідинної хроматографії.
а. Дегазація вакуумом - елюент витримують в колбі Кляйзена під вакуумом водоструминного насоса протягом декількох хвилин. При проведенні дегазації слід уникати кипіння елюенту.
б. Термічна дегазація застосовується для дегазації водноорганіческіх елюентів з високою часткою води. Рухому фазу поміщають в колбу, якої не герметично закривають пробкою, і залишають у водяній бані при температурі близько 50? С. Через 10-15 хвилин колбу закривають пробкою герметично і охолоджують її під струменем води до кімнатної температури.
в. Дегазація ультразвуком. Рухому фазу кілька хвилин обробляють ультразвуком, а потім дають їй відстоятися протягом 10-15 хвилин. Цей спосіб часто буває недостатньо ефективний для дегазації водноорганіческіх елюентів.
Сучасні насосні системи для рідинної хроматографії комплектуються системами автоматичної дегазації. Проте, при проведенні градієнтних аналізів обидві рухливі фази краще дегазувати попередньо і «вручну», по одному з наведених методів.
. Фільтрація рухомої фази. Для забезпечення безперебійної роботи насоса рухливу фазу бажано фільтрувати під вакуумом із застосуванням мембранного фільтру.
. Промивання колонки і вузлів рідинної системи. Після роботи з водноорганіческімі рухливими фазами, що містять солі і кислоти, всю рідинну систему (включаючи колонку) слід промити дистильованою водою з додаванням 5-10% органічного розчинника. Така промивка робиться для того, щоб в неробочий час додатково не зношувалися вузли рідинної системи хроматографа і сама нерухома фаза.
не ...
