%-ний розчин; сульфат міді (II), 1%-ний розчин; фенілтіомочевіна. 0,02%-ний розчин; розчин йоду в йодиді калію *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; очні піпетки; водяна баня з лабораторним термометром; годинник. p align="justify"> Матеріал. Слина, отримана, як в роботі 18, і розведена водою в 10 разів. p align="justify"> Метод заснований на порівнянні швидкості гідролізу крохмалю (продукт гідролізу крохмалю виявляють пробою з йодом) під дією ? - амілази слини до і після додавання фенілтіомочевіни, іонів Cl? і Cu2 +.
Хід визначення. Беруть чотири пробірки і наливають по 10 крапель: в першу - дистильованої води, в другу - розчину хлориду натрію, в третю - розчину сульфату міді і у четверту - розчину фенілтіомочевіни, а потім по 20 крапель розчину крохмалю і по 1 краплі розведеної слини. Вміст перемішують струшуванням, поміщають пробірки у водяну баню при 38 Вє С і засікають час початку інкубації. p align="justify"> Через кожні 1-2 хв з проб відбирають в інші пробірки по 1 краплі рідини і додають 1 краплю розчину йоду в йодиді калію. Відзначають час появи червоного забарвлення (стадія освіти Ерітродекстріни) при проведенні реакції з йодом в кожній з пробірок. p align="justify"> Оформлення роботи. Результати занести в таблицю, зробити висновок про дію вивчених речовин і про передбачуване типі інгібіторів. br/>
ФерментМодіфікатор актівностіСубстратВремя освіти Ерітродекстріни, хв (проба з йодом)
Робота 28. Дія конкурентних інгібіторів на сукцинат-дегідрогеназу (сукцинат: акцептор оксидоредуктаз; КФ 1.3.99.1) м'язової тканини
Реактиви. Малонова кислота, 1%-ний розчин, нейтралізований NaOH; сукцинат натрію, 1%-ний розчин; метиленовий синій, 1%-ний розчин; вазелінове масло. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 мл; водяна баня; лабораторний термометр. p align="justify"> Матеріал. М'язова кашка, отримана після забою тварини. p align="justify"> Метод заснований на порівняльному визначенні активності сукцинатдегідрогенази по знебарвлення в ході реакції метиленової сині (МС) як акцептора водню в присутності і у відсутності малонової кислоти.
Утворений ФАД? Н2 відновлює метиленовим синь (МС? Н2), в результаті чого відбувається знебарвлення розчину. Порівнюючи візуально зменшення інтенсивності синього забарвлення з пробами, що містять різні кількості малонової кислоти (ноос - СН2 - СООН), роблять висновок про тип дії її на фермент. p align="justify"> Хід визначення. У третій пробірки поміщають по 3-4 г м'язової кашки і додають у першу пробірку 0,8 мл води, в другу 0,2 мл розчину малонової кислоти і 0,6 мл води, а в третю - 0,8 мл розчину малонової кислоти.
У всі пробірки доливають по 1 мл розчину сукцинату натрію, по 1 краплі розчину метиленового синього і після перемішування по 3-4 краплі вазелінового масла. Пробірки ставлять у водяну баню при 37? С. Через 3-5 хв спостерігають знебарвлення розчину. p align="justify"> Оформлення роботи. Порівняти інтенсивність блакитного забарвлення в трьох пробірках і зробити висновок про механізм дії малонової кислоти на активність сукцинатдегідрогенази. p align="justify"> Практичне значення роботи. Конкурентні інгібітори різних ферментів широко застосовуються в біохімічних дослідженнях і в практичній медицині як лікарські препарати. У Зокрема, малонова кислота як конкурентний інгібітор сукцинатдегідрогенази використовується в експериментах на тварин для того, щоб вивчити зміни в обміні речовин в тканинах при блокаді цього ферменту, а також для дослідження самого механізму конкурентного гальмування. br/>
Робота 29. Неконкурентне інгібування каталази крові
Реактиви. Пероксид водню, 3%-ний розчин; азид натрію, 1%-ний розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; очні піпетки. p align="justify"> Матеріал. Цільна кров, розведена водою в 10 разів. p align="justify"> Метод заснований на візуальному порівнянні інтенсивності виділення бульбашок газу (кисню) при розкладанні пероксиду водню за участю каталази крові у відсутності і в присутності азиду натрію NaN3.
Хід визначення. У дві пробірки вносять по краплі крові і додають в одну їх них 2 краплі води, а в іншу - такий же об'єм розчину азиду натрію. Проби струшують. p align="justify"> Через 2 хв додають в обидві пробірки по 2 мл розчину пероксиду водню і порівнюють інтенсивність виділення бульбашок газу.
Оформлення роботи. За отриманими даними зробити висновок про дію азиду натрію на каталазу крові і вказати на практичне значення роботи. p align="justify"> Практичне значення роботи. Неконкурентними інгібіторами гемінових ферментів (цитохроми, цитохромоксидаза, каталаза і пероксидаза) є азиди і ціаніди, які взаємодіють із залізом гема, ...
