0 мг соєвого борошна і 2 краплі розчину фенолфталеїну, ретельно перемішують скляною паличкою і залишають стояти при кімнатній температурі.
Стежать за появою рожевого забарвлення вмісту в пробірках. Виділення аміаку виявляють також за запахом і за допомогою вологої лакмусового папірця, яку підносять до отвору пробірок. Порівнюють результати виявлення аміаку в трьох пробах. p align="justify"> Оформлення роботи. Дані оформити у вигляді таблиці, зробити висновок про специфічність уреази і її практичному значенні. br/>
ФерментСубстратПроби на аммиакФенолфталеинЗапахЛакмусовая папір
Практичне значення роботи. Ферменти з абсолютною субстратної специфічністю, до яких відноситься уреаза, каталізують перетворення тільки однієї речовини. Ці ферменти використовують в клінічній біохімії та фармації як аналітичні реагенти для визначення речовин, до яких вони мають абсолютну специфічність. Наприклад, уреаза використовується для визначення сечовини в біологічному матеріалі і лікарських препаратах. br/>
Робота 26. Специфічність дії амілази (? -1,4 - глюкан-4-глюкангідролаза; КФ 3.2.1.1.) І сахарази (?-D- фруктофуранозід-фруктогідролаза; КФ 3.1.1.26)
Реактиви. Крохмаль, 1%-ний розчин; сахароза, 2%-ний розчин; реактив Фелінга *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; водяна баня; лабораторний термометр; очні піпетки. p align="justify"> Матеріал.
Слина, розбавлена ​​(див. роботу 19).
сахараза, витягнута з дріжджів. (Для отримання сахарази з дріжджів 2 г дріжджів розім'яти в ступці, розтерти, додавши 10-12 мл дистильованої води. Вміст з ступки перенести у пробірку і поставити на водяну баню при 37? С на 10-15 хв. Відцентрифуговувати суміш при 3000 об/ хв протягом 10 хв. Надосадову рідина, яка містить фермент сахараза , Злити і використовувати в роботі).
Метод заснований на порівняльному вивченні гідролізу ? - амилазой і сахараза різних субстратів, що містять гликозидні зв'язку: крохмалю і сахарози. Гідроліз крохмалю і сахарози оцінюють пробій Фелінга на відновлюючі цукру (мальтоза, глюкоза).
Ферменти каталізують реакції за схемою:
? - Амілаза
Крохмаль + nH2O Декстрини + Мальтоза
сахараза
Сахароза + H2O Глюкоза + Фруктоза
Хід визначення. В одну пробірку вносять 10 крапель розчину крохмалю, в іншу - такий же об'єм розчину сахарози. Для виявлення специфічності ? - амілази в обидві проби додають по 5 крапель розбавленої слини, перемішують струшуванням і ставлять у водяну баню при 38? С на 10 хв . Потім з рідиною в обох пробірках проробляють пробу з реактивом Фелінга (див. роботу 19) і порівнюють забарвлення.
Для виявлення специфічності сахарази в одну пробірку наливають 10 крапель розчину крохмалю, а в іншу - сахарози і додають до них по 5 крапель екстракту сахарази дріжджів. Проби перемішують струшуванням і поміщають у водяну баню при 38? С на 10 хв, після чого з рідиною обох пробірок проробляють пробу з реактивом Фелінга. Порівнюють забарвлення. p align="justify"> Оформлення роботи. Дані занести в таблицю, зробити висновок про специфічність вивчених ферментів і позначити, до якого типу специфічності вони відносяться. br/>
ФерментСубстратПроба з реактивом ФелінгаСпеціфічность дії
Практичне значення роботи. Ферменти з абсолютною і відносною груповий субстратної специфічністю, що володіють меншою вибірковістю дії на субстрати, беруть участь, як правило, у гідролізі поживних речовин або перетворенні чужорідних сполук. У Зокрема, ? - амілаза і сахараза проявляють субсидія не до структури субстрату в цілому, а до типу гликозидних зв'язків, які перебувають у відповідних вуглеводах.
5. Модифікатори активності ферментів
Речовини, що змінюють активність ферментів (модифікатори), діляться на активатори та інгібітори. Вони стимулюють або пригнічують активність ферменту, впливаючи на його активний або алостеричний центри. Модифікуючі вплив різних сполук на активність ферменту встановлюють шляхом кінетичних досліджень. br/>
Робота 27. Активатори та інгібітори ? - амілази слини
Реактиви. Крохмаль, 0,5%-ний розчин; хлорид натрію, 1...
