хроматограми на папері на ФКК в плодах аронії чорноплідної (система: 70% розчин кислоти оцтової): 1 - відомий зразок (хлорогенова кислота); 2 - спиртове витяг плодів аронії чорноплідної.
Б) Реакція з лугом. До 0,5 мл отриманого вище спиртового витягу додавали кілька крапель 1% спиртового розчину лугу. Флавони і флавоноли розчиняються в лугах з утворенням жовтого забарвлення. Антоціани дають синє або фіолетове забарвлення.
В) Проба з 0,5% розчином хлорного заліза. До 0,5 мл отриманого вище спиртового екстракту додавали 1-2 краплі розчину хлорного заліза. Давати забарвлення з хлорним залізом - загальна властивість поліоксіфенольного з'єднання. Ортооксіфенольние групи в молекулах флавоноїдів обумовлюють зелену, а тріоксіфенольние групи - синє забарвлення.
Г) Проба з алюмінію хлоридом. До 1 мл спиртового витягу додавали 3-5 крапель 5% спиртового розчину реактиву. При наявності флавоноїдів з'являється брудно-жовте забарвлення [5, 12].
Д) Хроматографічне визначення. Випробуваний розчин. Близько 2,0г сировини, подрібненого до величини частинок, проходять крізь сито з отворами діаметром 1 мм, поміщали в конічну колбу зі шліфом місткістю 100 мл, додавали 20 мл 95% спирту етилового, закривали пробкою і перемішували протягом 30 хв на струшувати апараті. Після охолодження витяг фільтрували через паперовий фільтр.
На лінію старту хроматографічної пластинки із шаром силікагелю, на алюмінієвій підкладці, високоефективної (ПТСХ-АФ-В або аналогічної якості), розміром 100? 100 мм, проведену на відстані 1,5 - 2 см від нижнього краю пластинки, мікропіпеткою наносили 0,02 мл вилучення у вигляді плями діаметром близько 5 мм. В якості свідомо відомих речовин порівняння наносили по 0,02 мл розчини рутина і кверцетину також у вигляді плям діаметром близько 5мм. Платівку з нанесеними пробами висушували на повітрі при кімнатній температурі, потім поміщали в хроматографічну камеру (викладену зсередини фільтрувальної папером, попередньо насичену не менше 24 годин) з верхнім шаром суміші розчинників: н-бутанол -крижана оцтова кислота - вода (4: 1: 2) і хроматографіровалі висхідним методом.
Коли фронт розчинників пройшов не менше 8 см від лінії старту, пластинку виймали з камери, висушували у витяжній шафі при кімнатній температурі до видалення слідів розчинників і переглядали у видимому та УФ - світлі.
На хроматограмі випробуваного розчину на рівні плями достовірного зразка рутина виявляли зону адсорбції у вигляді плями жовтого кольору, яка повністю збігалася із зоною адсорбції спиртового витягу з плодів аронії черноподной (Rf - 0,57). При цьому допускається виявлення додаткових зон (рис. 4).
Малюнок 4 - Схема ТШХ на флавоноїди в плодах аронії чорноплідної (система: н-бутанол - кислота оцтова льодяна - вода (4: 1: 2)): 1 - відомий зразок розчину рутина; 2 - відомий зразок розчину кверцетину; 3 - спиртове витяг плодів аронії чорноплідної.
Визначення дубильних речовин
А) Осадження 1% розчином желатину: до 2 мл випробуваного розчину додавали по краплях 1% розчин желатину в 10% розчині натрію хлориду. При наявності дубильних речовин з'являється осад, зникаючий при додаванні надлишку желатину.
Б) Реакція з калію дихроматом: до 3-5 мл вилучення додавали 2-3 краплі 5% розчину калію біхромату. При наявності таннидов спостерігається потемніння розчину чи випадання жовто-коричневого осаду.
В) Реакція з реактивом Фоліна-Дениса (суміш фосфорномолібденовой і фосфовольфрамовой кислот). До 3-5 мл вилучення додавали 3-5 крапель реактиву Фолина-Дениса і невелика кількість натрію карбонату. При наявності таннидов утворюється вольфрамова або молібденова синь. Забарвлення стійка. Ця реакція може бути використана для кількісного визначення дубильних речовин [5, 12].
опеределения антоціанів
А) До 1 мл випробуваного розчину додавали 1 мл 1% кислоти хлористоводневої, розчин забарвлювався в інтенсивно червоний колір.
Б) У пробірку поміщали 0,5 мл витягання і додавали 0,5 мл 10% розчину натрію гідроксиду. У присутності антоціанів з'являлося фарбування синьо-зеленого кольору.
В) Метод ТШХ. На лінію старту хроматографічної пластинки із шаром силікагелю, на алюмінієвій підкладці, високоефективної (ПТСХ-АФ-В або аналогічної якості), розміром 100? 100 мм, проведену на відстані 1,5 - 2 см від нижнього краю пластинки, мікропіпеткою наносили 0,02 мл вилучення у вигляді плями діаметром близько 5мм. Платівку з нанесеними пробами висушували на повітрі при кімнатній температурі, потім поміщали в хроматографічну камеру (викладену зсередини фільтрувальної папером, попередньо насичену не менше 24 годин) з верхнім шаром сумі...
