ші розчинників: н-бутанол - кислота оцтова льодяна - вода (4: 1: 2 ) і хроматографіровалі висхідним методом.
Коли фронт розчинників пройшов не менше 8 см від лінії старту, пластинку виймали з камери, висушували у витяжній шафі при кімнатній температурі до видалення слідів розчинників і переглядали у видимому світлі.
На хроматограмі випробуваного розчину спостерігали зону адсорбції фіолетового кольору з величиною Rf близько 0,35 (ціанідин - 3-О- глюкозид); можлива присутність рожевого плями з величиною Rf близько 0,5 (глікозид мальвідін); допускається виявлення додаткових зон (рис. 5).
Відомо також, що в даній системі розчинників стандартний зразок ціанідин - 3-О- глюкозида дає Rf - 0,35.Ето дає нам можливість стверджувати, що у витягах з плодів аронії чорноплідної присутній дана речовина.
Малюнок 5 - Схема ТШХ на антоціани в плодах аронії чорноплідної
(система: н-бутанол - кислота оцтова льодяна - вода (4: 1: 2)):
- спиртове витяг плодів аронії чорноплідної;
- спиртове витяг чорниці звичайної
Для уточнення даних нами була використана ТШХ не тільки для плодів аронії чорноплідної, а й для плодів чорниці звичайної, для якої відомо з літературних даних значення Rf для ціанідин - 3-О-глюкозида, рівне 0,35. Для цього, з плодів чорниці звичайної було отримано спиртове витяг аналогічно методиці для плодів аронії і проведена ТШХ паралельно цих двох витягів на одній хроматографічної платівці. За результатами хроматограми в тонкому шарі сорбенту були ідентифіковані фіолетові плями, з величиною Rf=0,35 як у плодів аронії, так і у плодів чорниці звичайної, що дозволяє нам судити про наявність ціанідин - 3-О-глюкозида в плодах аронії (рис. 5).
Таблиця отриманих результатів якісного визначення (табл.1)
Таблиця 1. Якісний аналіз екстракту
Досліджувані веществаНалічіе речовин в екстрактеФенольние з'єднання + фенолкарбонові кислоти + Флавоноїди + Дубильніречовини + Антоціани +
4.2 Кількісний аналіз
Визначення суми флавоноїдів
Визначали спектрофотометричним методом з використанням комплексоутворюючої реакції з алюмінію хлоридом [5,12]. Показання знімали в УФ-області при довжині хвилі 410 нм.
Кількісний вміст флавоноїдів в перерахунку на рутин і абсолютно суху сировину коливалося в межах від 5,20% до 5,80%.
Визначення дубильних речовин
Використовували методику, запропоновану Г.М.Федосеевой зі співавторами, в якій проведено осадження дубильних речовин розчином желатину і повторне титрування фільтрату калію перманганатом. За різницею об'ємів титрування розраховували вміст у сировину дубильних речовин [5,12].
Методика визначення. Близько 3,0 г (точна наважка) подрібненої сировини, просіяного крізь сито з діаметром отвору 1 мм, поміщали в конічну колбу місткістю 250 мл, заливали 100 мл 40% спирту і кип'ятили зі зворотним холодильником на водяній бані протягом 30 хвилин. Екстракцію проводили повторно для більш повного виснаження сировини. Витяг охолоджували до кімнатної температури і проціджували у мірну колбу місткістю 250 мл, доводили до мітки водою (розчин А).
1) 10 мл розчину А поміщали в колбу для титрування місткістю 500 мл, додавали 250 мл води, 10 мл розчину індігосульфокіслоти і титровали перманганатом калію (0,02 моль/л) до золотисто жовтого забарвлення при постійному перемішуванні.
Паралельно проводили контрольний досвід (визначали індиго число). Брали 10 мл індігосульфокіслоти, додавали 250 мл води і титровали калію перманганатом (0,02 моль/л) до золотисто жовтого забарвлення при постійному перемішуванні.
мл розчину калію перманганату (0,02 моль/л) відповідає 0,004157г окисляються, у перерахунку на танін.
Зміст суми поліфенолів в перерахунку на абсолютно суху сировину у відсотках (Х) обчислювали за формулою:
х =, де
V - об'єм екстракту, взятий для титрування, в мілілітрах;
V1 - об'єм розчину калію перманганату (0,02 моль/л), що пішов
на титрування витягу, в мілілітрах;
V2 - об'єм розчину калію перманганату (0,02 моль/л), витраченого на титрування в контрольному досліді, у мілілітрах;
V3 - загальний обсяг вилучення, у мілілітрах;
К - 0,004157 - кількість речовин, що окисляються, відповідне 1 мл розчину калію перманганату (0,02 моль/л) в перерахунку на танін, в грамах;
m - маса наважки сировини, в грамах;
