идів методом [25, 3, 18, 27].
Виділення індивідуальних з'єднань наводять, як правило, методом адсорбційної хроматографії на поліаміді, силікагелі, целюлозі. В якості елюіруются сумішей використовується вода і водний спирт, якщо адсорбентом служить поліамід або целюлоза, або різні суміші органічних розчинників для всіх перерахованих адсорбентів [15, 3, 18].
Фенольні глікозиди в лікарській рослинній сировині можуть бути ідентифіковані хроматографією в тонкому шарі сорбенту або на папері [15, 25, 3, 18].
Для хроматографування в тонкому шарі сорбенту використовують системи розчинників: 1) n-бутанол - оцтова кислота - вода (4: 1: 5); 2) n-бутанол - оцтова кислота - вода-ксилол (6: 2: 3: 4); 3) хлороформ - метиловий спирт (8: 2) [15, 25, 3, 18].
При хроматографії на папері використовують 5, 10 і 15% - ную оцтову кислоту [15].
Для індивідуальних речовин визначають t-плавлення, питоме обертання, знімають УФ, ІК спектри [15, 25, 18, 27].
Розглянемо УФ та ІЧ спектри на прикладі арбутина. У зв'язку з наявністю в молекулі фенольних глікозидів ароматичних С-С зв'язків фенольні глікозиди мають макісмум поглинання в УФ спектрі при 270-300 нм. Максимум поглинання арбутина знаходиться при 287 нм (у складі арбутина є залишок гідрохінону з достатньою сполученої системою) і може бути використаний як для якісної характеристики, так і кількісного визначення арбутина а рослинному матеріалі. При аналізі УФ-спектрів у рослин, що містять арбутин можна відзначити, що на них присутні 2 максимуму поглинання, характерних для даного з'єднання при 220 і 284 нм, причому інтенсивність (вираженість) піків відповідає змісту арбутина в досліджуваних видах. Наприклад, при дослідженні мучниці, брусниці, зимолюбки, чорниці та лохини, найбільша інтенсивність піку при 220 нм характерна для мучниці, брусниці та зимолюбки, менш виражені піки в цій області для чорниці та лохини (рис. 1.4.1) [25, 18].
В ІК спектрі арбутина є характерні смуги при 3200- 3400 см - 1, обумовлені наявністю спиртових та фенольних гідроксильних груп; смуга 1515,1460, 1440 см - 1 типова для С=С- зв'язків. Є ряд смуг в області 800-1300 см - 1 (область відбитку пальців). Збіг спектрів ісседуемого глікозиду зі спектром достовірного зразка вказує на ідентичність з'єднання. Для ідентифікації фенольних глікозидів широко використовуються хімічні перетворення, аналіз, ацетилювання, метилювання і т.д. і порівняння прод?? ктов перетворення з літературними даними для передбачуваного глікозиду [8].
Також зараз поширюється ідентифікація фенолглікозіди за допомогою методу ВЕРХ [5, 26]. На малюнку (рис. 1.4.2) показана ВЕЖ-хроматограмма водного екстракту зимолюбки зонтичної, на якій по УФ-спектрами в порівнянні з достовірним зразком ідентифікований арбутин. У даному конкретному випадку, аналіз проводився на високоефективної рідинної хроматографії «Мілліхром-А - 02» з подальшою комп'ютерною обробкою результатів дослідження за допомогою програми МультіХром-СПЕКТР для Windows. В якості нерухомої фази використовували колонку ProntoSIL 120-5-C18 AQ, №80303 розміром 2,0Ч75 мм, розмір часток - 5,0 мкм; в якості рухомої фази - [4M LiClO4 + 0,1M HClO4]: H2O у співвідношенні 5:95. Швидкість подачі елюента - 100,00 мкл/хв. Температура - 40 ° C. Тиск - 2,0 MPa. Тривалість аналізу - 115 хв. Паралельно з випробуваним розчином в хроматограф вводилися розчини достовірних зразків арбутина, гідрохінону і рутина. Детектування даних речовин проведені по УФ-спектрами при довжинах хвиль 210-300 нм.
Істотну практику препаративного виділення індивідуальних рослинних з'єднань через трудомісткість технологічних прийомів і високої собівартості кінцевого продукту слід вважати виправданою при наявності в них переважаючих компонентів [16].
1.5 Біосинтез фенольних сполук
фенольний фармакологічний лікарський
Біосинтез у різних груп фенольних сполук протікає по одній і тій же принциповій схемі, із загальних попередників і через подібні проміжні продукти. Всі фенольні сполуки в рослинах утворюються з вуглеводів (ацетатно-малонатний шлях) та продуктів їх перетворення і в процесі біосинтезу проходять шікіматний шлях. Биосинтезу багатьох фенольних сполук передує утворення амінокислот - L-фенілаланіну і L- тирозину. Фенольні сполуки утворюються двома шляхами.
Ацетатні-малонатний шлях (схема 1.5.1) встановлено американськими вченими Берчем і Донованом в 1955 році. Попередником є ??оцтова кислота, яка утворюється з цукрів. У результаті ступінчастою конденсації залишків оцтової кислоти утворюються полікетометіленовие кислоти. Приєднання відбувається за типом «голова» - «хвіст» за обов'язкової участі ферменту Коензиму А з проміжним утворенням ацетил-Коензиму А, а потім Ма...
