другий варіант переважно. Але мембранні фільтри набагато дорожче паперових або скловолокнистих.
Для даної мети зручні фільтри діаметром 24 мм, що дозволяє легко вносити їх у флакони сцинтиляційного лічильника. Фільтрування здійснюють за допомогою простого пристрою, зображеного на рис.2.
В
Рис. 2. br/>
У колбу Бунзена (1) вставляють на гумовій пробці кільцеву підкладку для фільтра (2) з нержавіючої сталі у вигляді решітки з кільцевим шліфованим фланцем. На неї кладуть фільтр (3), а на фільтр ставлять резервуар (4), виточений з такої ж сталі і теж зі шліфованим фланцем. Фланці стискають пружинними затискачами (не показані). Така легко розбірна конструкція зручна для маніпуляцій з фільтром.
У резервуар заливають реакційну суміш зі зваженим у ній осадом досліджуваного продукту (у першому варіанті) або без осаду (у другому варіанті) і при невеликому розрідженні відсмоктують рідину. Радіоактивні попередники вимивають 5-6 разів змінюючи в резервуарі промивну рідину, не спроможну розчинити осад. (Наприклад, ту ж, в якій велося осадження полімеру)
Якщо фільтрів багато, то, пронумерувавши їх попередньо по краю олівцем, можна промивку вести "в обсязі", великими партіями, змінюючи промивну рідина кожні 15 хвилин і періодично струшуючи її. Останні промивки в будь-якому випадку ведуть етанолом, потім ефіром для повного видалення води під час подальшої сушки фільтрів. Це особливо важливо для "Об'ємних": паперових і скловолокнистих фільтрів, де вода повинна бути повністю вилучена з внутрішніх пір, так як прорахунок радіоактивності осаду на фільтрі ведуть у флаконі з чистим толуоловим сцинтилятором. Залишки води в порах можуть перегородити Сцинтилятори доступ до радіоактивного речовини. Добре висушений фільтр в толуоловом сцинтиляторі виглядає однорідно напівпрозорим. Сушку ведуть на повітрі при кімнатній температурі 15-20 хвилин (до зникнення запаху ефіру).
Положення "об'ємного" фільтра у флаконі, - лежачи на дні або стоячи на ребрі, - не відіграє суттєвої ролі. Спалахи світла під час випущенні (3-електронів все одно "засвічують" всю рідину у флаконі і будуть помічені обома ФЕУ. Втім, мембранний фільтр, все-таки, краще покласти на дно плівкою речовини вгору.
У випадку малих обсягів інкубаційної суміші навіть у першому варіанті використання фільтрів не обов'язково проводити реакцію і осадження полімеру в обсязі для подальшого збору осаду фільтруванням. До 50 мкл реакційної суміші можна просто нанести на паперовий фільтр і дати рідини вбратися. Цю операцію можна провести за один прийом для кількох десятків пронумерованих фільтрів, ряд за рядом наколоті шпильками на шар гуми, так щоб вони її не торкалися. Потім гуму з фільтрами поміщають у вологу камеру, термостатувати при температурі ферментативної реакції. По її закінченні фільтри разом з шпильками знімають і поміщають в велику склянку, заповнений 5%-ним розчином Тху або етанолом. Осадження полімеру буде відбуватися всередині фільтрів. (С шпильок фільтри знімати не слід, так як шпильки оберігають їх від злипання) Там ж, у склянці роблять і всі промивки. Потім фільтри знову наколюють на гуму, сушать і поміщають у флакони зі сцинтилятором в порядку їх номерів.
Зрозуміло, при використанні фільтрів ефективність рахунки знижується по порівняно з прорахунком препарату, розчиненого в сцинтиляторі. Деяка частина енергії (3-електронів губиться на зіткнення з матеріалом осаду і просторовою сіткою фільтра. Однак Р-електрон, що втратив частину енергії, зовсім не обов'язково вже нездатний викликати світлову спалах в сцинтиляторі. А для рахунку важливо тільки число імпульсів у хвилину, а не їх амплітуда (за винятком рахунку подвійний мітки). Проте, слід контролювати гальмують фактори - товщину і щільність осаду, а також і самого фільтра, з тим, щоб по можливості зменшити число імпульсів, виявилися не прорахованими через занадто великої втрати енергії по дорозі до Сцинтилятори.
Введення радіоактивної мітки в біологічні препарати
a ) In viuo < b> .
Найпростіше надати непросту, а іноді і небезпечну операцію введення мітки самій природі. Для цього в живильне середовище вносять радіоактивно мічений попередник синтезу даного нас речовини в організмі. Простіше всього це зробити для бактерій. Мічений по тимідин за 1 годину легко включається в її ДНК до рівня, що становить близько 10% внесеної в середу радіоактивності. Точно так само мітять ДНК в тварин клітинах, що ростуть в культурі тканини. p> Імпульсну мітку в іРНК бактерій здійснюють шляхом введення в живильне середовище С-урацилу або того ж Р-ортофосфата - після вичерпання або відмивання нерадіоактивної фосфору. Зважаючи швидкості протікання процесів метаболізму у бактерій тривалість такого імпульсу має бути слабкий (10-30 сек.). Після чого життєдіяльність бактерій треба негайно припинити, наприклад, ...
