вилити їх суспензію на дрібно роздроблений лід, що містить азид натрію.
Метку в бактеріальні білки, як і в білки вищих організмів в культурі кліток, найзручніше вносити за допомогою міченого по С або S метіоніну. Нагадаю, що метіонін є незамінною амінокислотою (тобто не синтезується в самому організмі) для клітин усіх вищих тварин і деяких бактерій. Крім того, з нього починається синтез будь-якого білка, що дозволяє стежити за початком цього процесу.
Введення мітки через дієту тварин практично не використовується, оскільки радіоактивні ізотопи по шляхах метаболізму включаються в багато біологічні молекули. Крім того розбавлення радіоактивної мітки відбувається за рахунок власних запасів організму, наприклад, незамінних амінокислот, отриманих в результаті катаболізму (розщеплення) власних білків. Все це вимагає великої витрати дорогих радіоактивних препаратів і пов'язано з підвищеною ступенем радіаційної небезпеки.
Тут доречно зауважити, що радіоактивна мітка вводиться, точніше мовити, створюється в амінокислотах, нуклеотидах та інших біологічних значущих молекулах шляхом спеціального опромінення в атомних реакторах. Каталоги спеціалізованих закордонних фірм утримують багато сотень найменувань радіоактивно мічених молекул. Чого, на жаль, не можна сказати про вітчизняної продукції. б) In vitro .
Введення радіоактивної мітки у вже очищені білки або нуклеїнові кислоти можна виробляти і в лабораторних умовах за допомогою хімічних реакцій заміщення чи приєднання радіоактивних атомів, а іноді і простих радіоактивно мічених молекул. Ці реакції досить складні і розглядати їх тут не має сенсу. Найчастіше введення мітки здійснюється в процесі йдуть in vitro ферментативних реакцій синтезу біополімерів з використанням радіоактивно мічених попередників (Р-АТФ, амінокислот, нуклеозідтріфосфатов і інш.) Деякі з ферментів приєднують тільки одне Мічені ланка на кінець ланцюга відповідного полімеру.
Інші ферменти, що ведуть у пробірці комплементарний синтез біополімерів (ДНК-полімерази, РНК-полімерази, рибосомальні комплекси) за наявності радіоактивно мічених мономерних попередників (рибо-і дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, аміноацил-тРНК) можуть включати радіоактивну мітку в усі або деякі ланки полімерних ланцюгів, надаючи їм дуже високу ступінь радіоактивності.
На закінчення слід зазначити, що з причин безпеки та зручності детектування результатів біосинтезу в останні роки виникла тенденція до заміні радіоактивної мітки на флюоресцентную, що ми вже спостерігали на прикладі еволюції методу секвенування ДНК.
Література
1. Авдонин П.В., Ткачук В. А, Рецептори і внутрішньоклітинний кальцій. 1994. - Наука, Москва. - С.29-42. p> 2. Авцин А.П., Жаворонков А.А., Ріш М.А., Строчкова Л.С. Мікроелементи людини, Медицина. М. - 1991. p> 3. Анестіаді В.Х., Нагорний В.А. Про пато-і морфогенез атеросклерозу. Кишинів, Медицина. - 1985. - С.92. p> 4. Антонов В.Ф. Ліпіди і іонна проникність мембран. - М.: Медицина, 1982. p> 5. Аронов Д.М., Бубнова Н.Р., Перова Н.В. та ін Вплив ловастатину на динаміку ліпідів і аполіпротеідов сироватки крові після максимальної фізичної навантаження в період харчової ліпемії у хворих на ІХС// Кардіологія, - 1995. - Т.35. - N 31. - С.38-39. p> 6. Атаджанов М.А., Баширова Н.С., Усманходжаева А.І. Спектр фосфоліпідів в органах-мішенях при хронічному стресі// Патологіч. фізіологія і експер. терапія. - 1995, - N 3: - С.46-48. br/>
