лекули. Відновлення дисульфідних зв'язків призводить до втрати 92% активності пост - НТ - 1 і 50% пост - НТ - 2. Повторне окислення відновлює первинну активність нейротоксинов. Мабуть, велика стійкість пост - НТ - 2 до хімічних впливів пов'язано з наявністю п'ятої дисульфідній зв'язку, стабілізуючою ділянку поліпептидного ланцюга. У теж час у пост - НТ - 1 цю ж ділянку молекули найбільш подовжений і позбавлений дисульфідних містків. Наявність містків обумовлює стійкість пост - НТ і до термічного впливу. Так, в кислому середовищі піст - НТ витримують нагрівання до 100 ° С протягом 30 хвилин без помітної втрати активності або обробку 8М сечовиною протягом 24 годин, але інактивується лугами.
Розшифровка первинної структури нейротоксических поліпептидів дозволила поставити питання про локалізацію і будову активного центру молекули, що вступає у зв'язок з холінових рецептором. Вивчення будови цих поліпептидів вказує на наявність в молекулах нейротоксинов як? так і?-структур. Центральна частина молекули пост-НТ - 1 вільна від дисульфідних зв'язків, може володіти більшою?-Спирализация. Крім того, гідрофільний характер більшості бічних ланцюгів амінокислотних залишків, складових послідовність від позицій 24-25 до положення 39-40, може зумовити проекцію цієї петлі на зовнішню сторону молекули, тому не виключено, що активний центр локалізується в цій ділянці.
Важливе значення має аналіз місця розташування і хімічна модифікація інваріантних амінокислот, що зустрічаються в гомологічних нейротоксин в одних і тих же ділянках. Ці амінокислоти, що збереглися в процесі еволюції в однакових ділянках поліпептидного ланцюга, можуть брати участь в організації активного центру або забезпечувати підтримку активної конформації молекули. Наявність постійних амінокислот вимагає наявність інваріантного триплетного генного коду в молекуде ДНК, необхідного для синтезу даної амінокислотної послідовності.
Оскільки мішенню для пост - НТ, так само як і для ацетилхоліну, є холінорецептор, то мабуть активні ділянки нейротоксинов повинні мати схожість з четвертинної амонієвої і карбонільної групами ацетилхоліну. Було встановлено, що вільні аміногрупи, в тому числі і N-кінцеві, не є облігатними для забезпечення токсичної активності. Ацітілірованіе 6 аміногруп в нейротоксин з отрути таїландської кобри призвело до втрати 1/3 активності.
Можна було припускати, що карбонільні групи пептидного складу завжди присутні в молекулі пост - НТ можуть мати значення при забезпеченні токсичності. Однак вони малодоступні в реакції взаємодії з рецептором. Більшою мірою відповідають цій вимозі бічні групи бічних ланцюгів інваріантних аспарагінової кислоти і аспарагина. Модифікація аспарагінової кислоти метиловим ефіром гліцину призводить до втрати активності на 75% від початкового значення.
Необоротне зв'язування між пост - НТ і холінорецептор не можна пояснити тільки взаємодією гуанідинових і карбонільних груп пост - НТ з відповідними ділянками рецептора. Їх взаємодія повинна носити в основному електростатичний характер, однак, комплекс рецептор - токсин НЕ дисоціює в концентрованих сольових розчинах. Ймовірно ці дві функціональні групи служать «ділянками впізнавання» при первинному контакті пост - НТ і рецептора. Кінцеве ж необоротне зв'язування обумовлюється протеїн - протеїновим взаємодією, що включають вже інші ділянки пост - НТ і холінорецептор. [2]
3. Хімія пресинаптических нейротоксинов
<...
