товуються як вектори для клонування молекул ДНК, яка потім може бути перенесена в клітини самих різних видів.
Якщо плазміди не можуть стабільно співіснувати в одній клітці в умовах відсутності селективного тиску, їх називають несумісними. Несумісність плазмід обумовлюється придушенням реплікації однієї з них і (або) блокуванням розподілу дочірніх молекул ДНК по клітках перед їх розподілом. Ці обидва механізми діють незалежно один від одного.
Несумісність, викликана придушенням реплікації, спостерігається у плазмід як із суворим, так і з ослабленим контролем реплікації. Вона обумовлена ??існуванням у плазмід генетичного механізму підтримки числа плазмідних копій на певному рівні, який призводить до того, що в клітці тільки одна з двох плазмід ( резидентная або з меншою ймовірністю увійшла) зберігає здатність до подвоєння.
Структура знаменитої плазміди PBR322 <# «justify"> 2.2 Бактеріофаги
За допомогою плазмідних векторів можна клонувати фрагменти ДНК довжиною до 10 т. п. н. Однак при створенні геномних бібліотек часто доводиться працювати з більш великими фрагментами. Для цього були розроблені вектори на основі бактеріофага ? Е. соli.
Після проникнення в клітину події можуть розвиватися за двома сценаріями. Якщо реалізується литический цикл, то фаг починає інтенсивно розмножуватися і приблизно через 20 хв клітина руйнується (лизирует) з вивільненням до 100 нових фагових частинок. При альтернативному варіанті розвитку подій фагова ДНК включається в хромосому Е. coli як профаг і реплікується в клітці разом з нормальними бактеріальними генами (стан лизогении).
Однак при нестачі поживних речовин чи інших несприятливих обставин інтегрована фагова ДНК вивільняється, і запускається литический цикл розвитку. Розмір ДНК фага? становить приблизно 50т. п. н., причому значна її частина (близько 20 т. і. н.) несуттєва для розмноження фага і відповідає за його вбудовування в хазяйську ДНК. У зв'язку з цим виникла ідея, що її можна замінити фрагментом іншої ДНК еквівалентного розміру. Утвориться рекомбінантна молекула буде реплицироваться в клітці як ДНК «рекомбінантного» фага? , «Вставшего» на литический шлях розвитку.
Щоб зрозуміти, як функціонує векторна система на основі фага? , Необхідно розглянути молекулярні аспекти литического циклу розвитку. Інфекційна фагова частка має головку, в якій укладена щільно упакована ДНК довжиною приблизно 50 т. п. н., І відросток та відходять від нього тонкими білковими нитками (фибриллами). Збірка головки відростка і упаковка ДНК чітко скоординовані. ДНК фага?- Це лінійна двох цепочечная молекула довжиною 50 т. п. н. з одноланцюжковий 5'-«хвостами» з 12 нуклеотидів. Їх називають липкими (cos) кінцями, оскільки вони взаємно комплементарні і можуть злучатися один з одним. Після того як фагова ДНК проходить через відросток і потрапляє в Е. coli, cos-кінці з'єднуються з утворенням кільцевої молекули. На ранньому етапі литического циклу внаслідок реплікації кільцевої молекули ДНК утворюється лінійна молекула, що складається з декількох сегментів довжиною 50 т. п. н.
Кожен з таких сегментів упаковується в білкову г...
