онкогенах і генах-супрессорах виявляються також при використанні в якості вихідного матеріалу клітинної РНК, яку перетворюють на реакцію зворотної транскрипції в компліментарну (С)-ДНК і амплифицируют за допомогою ПЛР. Даний метод (RT-ПЛР) широко застосовують для виявлення експресії генів у різних тканинах.
Відомо, що нормальні й пухлинні клітини розрізняються за експресії багатьох сотень генів, тому розроблено сучасні методи серійного аналізу експресії, засновані на технології мікрочіпів і дозволяють оцінювати сотні і навіть тисячі генів одночасно.
Одним з нових перспективних молекулярних маркерів пухлини є телоізомераза, рібонуклеопротеіновий фермент, що нарощує нуклеотидні послідовності на кінцях хромосом (теломерах) активність даного ферменту постійно присутня в більш ніж 90% пухлин і практично не виявляється в нормальних тканинах. Несміт загонів на безсумнівну перспективність і високу точність методів молекулярної діагностики, питання про їх специфічності і чутливості зберігає свою актуальність. Це пов'язано з тим, що пухлини завжди складаються з суміші нормальних і злоякісних клітин, тому що виділятимуться з них ДНК також гетерогенна, що необхідно враховувати при вирішенні питання про застосовність молекулярних тестів.
Проте, методики, що базуються на ПЛР, технологічно виключно чутливі і здатні виявляти специфічні генетичні порушення задовго до формування морфологічно визначеної пухлини.
Нині сформувалося кілька напрямків використання молекулярних тестів в онкології.
) Раннє виявлення пухлин найбільш часто грунтується на визначенні мутацій ras і p53, виявлення яких дозволяє в деяких випадках судити про стадії пухлинного процесу. Інформативним раннім маркером раку товстої кишки служать мутації гена АРС, які виявляються більш ніж у 70% аденом. Мікросателітної маркери високо ефективні у ранній діагностиці раку сечового міхура і простати. Широкий спектр пухлин може бути діагностований з використанням протоколів активності телоізомерази.
) Метастазування і поширеність пухлини також можуть оцінюватися з застосуванням молекулярних тестів. Найбільш часто для цих цілей використовують RT-PCR метод виявлення змін експресії генів у пухлинних клітинах.
) Аналіз цитологічних і гістологічних препаратів з допомогою молекулярних тестів знаходить все більш широке застосування. Прикладом може служити визначення HPV вірусів при раку шийки матки, а також застосування молекулярних тестів для виявлення мутацій онкогенів безпосередньо на гістологічних зрізах.
) Проміжні біомаркери служать для виявлення клональних і генетичних змін, що дозволяють передбачити появу пухлин. Ці маркери успішно використовуються для оцінки ефективності онкопротектором на популяційному рівні.
) Генетичне тестування онкологічного ризику стало можливим у зв'язку з відкриттям генів схильності до онкологічних захворювань, що виявилося особливо актуальним для оцінки ризику серед членів так зазивають «високо ракових» сімей.
ДНК-тестування успішно застосовується при різних успадкованих пухлинах: ретинобластоме, поліпозі кишечника, множинних ендокринних пухлинах другого типу слідом за клонуванням генів схильності до раку молочної залози і яєчників.
Одна з істотних проблем, що виникають при діагности...
