робіркою кілька разів для отриманого екстракту. Потім центрифугальні пробірки з осадом висушують при температурі 100-105 ° С до постійної маси.
Зміст полісахаридів у відсотках (X) обчислюють за формулою:
де: 1 - маса пробірки, в грамах; 2 - маса пробірки з осадом, в грамах; - маса наважки препарату, в грамах [51].
3.4 Визначення антиоксидантної активності субстанції
Антиоксидантну активність визначали на тканинах печінки щурів. Для отримання гомогенату наважку (0,5-1,0 г) тканини печінки щурів після промивання в охолодженому фізіологічному розчині поміщали в 10 мл середовища, що містить 0,85% NaCl і 50мл КН 2 РО 4, (рН 7,4 при 4 ° С) і гомогенизировали гомогенізатором типу Polytron протягом 90 сек. Гомогенат центрифугували при 10000g протягом 20 хв.
мікросомного фракцію отримували, Центріфугіруем супернатант при 30000g протягом 60 хв. Надосадову рідину обережно зливали і осад, що представляє собою фракцію важких мікросом, суспендованих в середовищі, що містить 25% гліцерину, 0.1 мл ЕДТА, 0.2 мл СаСl 2, 10 мл гистидина, (рН 7.2 при 4 ° С) і зберігали при мінус 4 ° С .
Про інтенсивність перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) в мікросомах печінки судили за змістом ТБК-активних продуктів. Концентрацію малонового діальдегіду (МДА) визначали за інтенсивністю розвивається забарвлення в результаті взаємодії з тіобарбітурової кислотою (ТБК) за методом Н.О. Ohkawa e.a. [82]. Для індукції процесу ПОЛ в мембранах застосовували систему Fe 2 + (0,02 мМ) + аскорбат (0,5 мМ). Окислення проводили в середовищі гомогенізірованія в термостатіруемого осередках при 37 ° С з постійним перемішуванням протягом 60 хв. За накопиченням малонового діальдегіду (МДА) - продукту ПОЛ, стежили за реакцією з 2-тіобарбітуровою кислотою, оптичну щільність вимірювали при 532 нм. Розрахунок вмісту продуктів, що реагують з ТБК, проводили з урахуванням коефіцієнта молярної екстинкції МДА, рівного 1.56? 10 травня М - 1? см - 1 [52, 53].
.5 Визначення фізичних параметрів субстанції
Визначення втрати маси субстанції при висушуванні
Визначення виконується при використанні аналітичних ваг і сушильної шафи, наступним порядком:
Стакан для зважування (бюкс) висушити в умовах, описаних для випробуваної субстанції, протягом 1 години в сушильній шафі, потім охолодити в перебігу на 40 - 45 хв. і зважити. Помістити в бюкс вказане в НД кількість випробуваної субстанції, записати результат в журнал, закрити бюкс кришкою і знову зважити. Бюкс із субстанцією помістити в сушильну шафу і висушити до постійної маси або на певний час, вказане в НД. Витягнути бюкс з висушеної субстанцією із сушильної шафи, помістити в ексикатор на 40 - 45 хв і зважити. Результат записати в журнал. Втрату в масі при висушуванні розрахувати за формулою:
, (18)
де: m 4 - маса бюкса з навішуванням після висушування, г; m 3 - маса бюкса з навішуванням до висушування, г; m 2 - навішування випробуваної субстанції, м.
Допускається використання аналізатора вологості при умовах, зазначених в НД [10, 54].
Визначення сипучості
Визначення проводиться на обладнанн...
