іст всіх пробірок фільтрують через паперовий фільтр в чисті пробірки. З фільтратом проробляють реакції на глюкозу і молочну кислоту. p align="justify"> Для проведення реакції на глюкозу беруть по 0,1 мл фільтрату, переносять його в чисті пробірки і додають в них по 0,4 мл води і по 2,0 мл о-толуїдинового реактиву. Поміщають пробірки у водяну киплячу баню на 8 хв, після чого охолоджують під струменем холодної води. Порівнюють інтенсивність забарвлення досліджуваних проб. p align="justify"> Для проведення реакції на молочну кислоту до залишився фільтрату в обох пробах додають по 5 крапель розчину сульфату міді і по 0,25 г оксиду кальцію (для осадження вуглеводів, які заважають виявленню молочної кислоти). Проби залишають стояти 10 хв при кімнатній температурі, періодично струшуючи їх. Потім вміст пробірок фільтрують через паперовий фільтр у дві чисті пробірки, поміщені в лід або сніг. Відбирають по 10 крапель фільтрату і обережно додають в кожну з них по 30 крапель концентрованої сірчаної кислоти. Всі пробірки поміщають на 5 хв у киплячу водяну баню (для перетворення молочної кислоти в ацетальдегід). Потім пробірки охолоджують і додають по 2 краплі спиртового розчину гваякола. Через 20 хв порівнюють інтенсивність забарвлення в пробах. p align="justify"> Оформлення роботи. Результати оформити у вигляді таблиці. br/>
Досліджувана пробаСубстратИнгибиторРеакция на глюкозуРеакція на молочну кислоту
Зробити висновок про наявність гліколізу в м'язової тканини і про методичні підходи до його вивчення.
Практичне значення роботи. При анаеробному розпаді вуглеводів утворюється дві молекули АТФ на одну молекулу розщепленої глюкози, що є важливим додатковим джерелом утворення енергії. В еритроцитах гліколіз є єдиним способом виробництва енергії. В анаеробних умовах, коли організм відчуває нестачу кисню, цей шлях утворення енергії є основним для збереження життєдіяльності тканин. В експерименті та клініці визначення швидкості гліколізу в клітинах крові і біоптату широко використовується для оцінки утворення енергії анаеробним шляхом. Крім того, цей метод дозволяє вивчити механізм дії різних лікарських препаратів і отрут, які можуть надавати негативну дію, блокуючи одну зі стадій ферментативного процесу. br/>
Робота 42. Аналіз аденіннуклеотидів методом іонообмінної хроматографії
Реактиви. Скляні пластинки (9х12 см) з нанесеним тонким шаром діетіламіноетілцеллюлози (ДЕАЕ-целюлоза), що є аніонообмінної смолою; соляна кислота, 0,02 М розчин. p align="justify"> Обладнання. Хімічний стакан; очна піпетка; аркуш білого паперу; вентилятор; хроматоскоп. p align="justify"> Матеріал. Аденозинтрифосфат натрію, 1%-ний розчин для ін'єкцій. p align="justify"> Метод заснований на ефекті іонного обміну, що складається в тому, що аденіннуклеотидів, що мають негативний заряд, взаємодіють з позитивними групами ДЕАЕ-целюлози (нерухома фаза), а при проходженні по адсорбенти розчину соляної кислоти нуклеотиди заміщуються на аніони Cl?. При цьому найлегше витісняється АМФ, через що він просувається далі всіх, потім АДФ і АТФ, який залишається поруч з лінією старту. Переглядають хроматограму в ультрафіолетовому світлі, в якому нуклеотиди, внаслідок поглинання при 260 нм, виглядають у вигляді темних плям. p align="justify"> Хід визначення. Скляну пластину з ДЕАЕ-целюлозою кладуть адсорбентом вгору на аркуш білого паперу і, відступивши від краю пластинки на 2 см, проводять простим олівцем лінію старту, а в центрі окреслюють гурток діаметром 3-4 мм для нанесення досліджуваної проби. Наносять очної піпеткою краплю розчину натрію аденозинтрифосфату в центр гуртка і підсушують пляма на повітрі протягом 5 хв за допомогою вентилятора. p align="justify"> У хімічний стакан, який використовують як хроматографическую камеру, наливають розчин соляної кислоти так, щоб шар рідини був висотою приблизно 1 см. Опускають кінець платівки з нанесеною пробою в розчин соляної кислоти. Для герметичності склянку закривають клаптем гумової рукавички, натягнувши його і закріпивши за допомогою гумового колечка. p align="justify"> Після того як фронт розчинника досягає верхнього краю пластинки, її виймають із стакана і підсушують на повітрі за допомогою вентилятора. Хроматограму поміщають в хроматоскоп і в ультрафіолетовому світлі окреслюють простим олівцем темні плями розділилися аденіннуклеотидів. p align="justify"> Оформлення роботи. Замалювати положення плям аденіннуклеотидів на хроматограмі і зробити висновок про якість досліджуваного препарату АТФ для ін'єкцій. p align="justify"> Практичне значення роботи. Поділ нуклеотидів методом тонкошарової іонообмінної хроматографії використовується для вивчення складу нуклеотидів і визначення їх вмісту в тканинах, а також для розрахунку енергетичного заряду адениловой системи в нормі і при різних патологічних станах. У фармації цей метод використовується для контролю якості преп...
