офільтрів, що забезпечують освітлення препарату ультрафіолетовим або синьо-фіолетовим світлом із заданою довжиною хвилі.
Метод ПЛР був розроблений співробітником фірми Cetus K. Mullis в 1983 р Існують різні модифікації цієї реакції. В даний час використовують ПЛР зі зворотною транскрипцією в режимі реального часу (ЗТ-ПЛР), суть якої полягає в ампліфікації певних ділянок ДНК в процесі повторюваних температурних циклів [8, 9].
Справжнє дослідження присвячене порівняльному аналізу діагностичного значення методів прямої ІФ та ОТ-ПЛР з метою оптимізації діагностичних підходів в тактиці ведення хворих на гострі респіраторні захворювання та грип.
3.1 Матеріали та методи
Всього в дослідження включений 81 чоловік і 59 жінок (140 пацієнтів), що надходили в відділення гострих респіраторних вірусних інфекцій ГКУЗ ІКБ № 1 Департаменту охорони здоров'я м Москви в стані середньої тяжкості з направітельним діагнозом: ГРВІ або Грип raquo ;. Середній вік хворих - 35,5 ± 1,6 року (від 15 до 87 років). Критеріями включення пацієнтів у дослідження були: наявність симптомів грипу та ГРВІ (підвищення температури тіла, симптоми інтоксикації і катарального запалення дихальних шляхів); обстеження двома методами для підтвердження грипу (пряма ІФ та ПЛР) в перші дві доби від моменту надходження хворого в стаціонар. При цьому матеріал, взятий від хворого для проведення цих досліджень, повинен був містити достатню кількість клітин епітелію носоглотки для аналізу. Критеріями виключення з дослідження були: наявність хронічної обструктивної хвороби легень, вагітність.
Всім пацієнтам, включеним у дослідження, проводилося стандартне загальноклінічне обстеження: збір анамнезу захворювання, об'єктивний огляд, аналіз клінічної картини в зіставленні з даними лабораторно-інструментальних методів дослідження (загальні аналізи крові та сечі, рентгенологічне дослідження органів грудної клітини). Для оцінки ступеня дихальної недостатності хворим проводилася пульсоксиметрія. За наявності у пацієнта пневмонії за даними рентгенологічного дослідження органів грудної клітки додатково призначався біохімічний аналіз крові (визначення рівнів аланінамінотрансферази (АлАТ), аспартатамінотрансферази (АсАТ), сечовини, креатиніну, креатинінфосфокінази), а також аналіз крові для оцінки кислотно-основного стану та електролітів.
Молекулярно-генетичне дослідження здійснювалося за допомогою ЗТ-ПЛР з гібридизаційним-флуоресцентною детекцією продуктів ампліфікації для виявлення генетичного матеріалу вірусів грипу А (сезонного), грипу А (H1N1) pdm09, грипу В в епітелії носоглотки/ротоглотки за допомогою тест-систем АмпліСенс® з аналітичною чутливістю - 1000 мікроорганізмів в 1 мл біологічного матеріалу.
Імунологічне дослідження виконувалось за допомогою методу прямої ІФ. Діагностикум являє собою специфічні моноклональні антитіла (імуноглобуліни), мічені флуоресцеінізотіоціанатом. У роботі використовувалися серії діагностикумів виробництва ФГБУ НДІ грипу (м.Санкт-Петербург), робоче розведення діагностикумів було не нижче 1:16. Аналіз мазків-відбитків з носоглотки проводився за допомогою люмінесцентного мікроскопа Біомед - 6 (Росія).
. 2 Результати
Для проведення порівняльного аналізу методів прямої ІФ та ОТ-ПЦР група хворих (n=140), в якій були застосовані одночасно ці дві методики з метою уточнення етіології основного захворювання, була розділена на три підгрупи: 1 я підгрупа - пацієнти, у яких діагностика грипу двома методиками проводилися в один день; 2-я підгрупа - пацієнти, яким ПЛР було виконано раніше методу ІФ на 1-2 доби; Третій підгрупа - пацієнти, яким метод прямої ІФ був проведений раніше ПЛР на 1-2 доби. Результати дослідження епітелію носоглотки методами прямої ІФ та ОТ-ПЦР у 140 хворих, включених у дослідження, представлені в табл. 1-3.
Виконано порівняння частоти реєстрації чотирьох комбінацій (профілів) результатів тестів прямий ІФ та ОТ-ПЦР: ІФ + /ПЛР + raquo ;, ІФ - /ПЛР + raquo ;, ІФ + /ПЛР - raquo ;, ІФ - /ПЛР - .
При порівняльному аналізі результатів лабораторного дослідження в групі пацієнтів (n=20), яким ЗТ-ПЛР і дослідження методом прямої ІФ проводили в один день і в перші 3 дні від початку захворювання, частота виявлення профілю ІФ - /ПЛР + була найвищою і достовірно відрізнялася від частоти виявлення профілів ІФ + /ПЛР + і ІФ + /ПЛР - (p=0,0005 і p=0,0019 відповідно).
При порівняльному аналізі результатів лабораторного дослідження в групі пацієнтів (n=37), яким ЗТ-ПЛР і дослідження методом прямої ІФ проводили в один день і на 4-5 добу від початку захворювання, частота виявлення профілю ІФ laquo ; - /ПЛР + була також найвищою і достовірно відрізнялася в...
