ція незамінних амінокислот у клітинах не нижче 0,01 - 0,04 мМ.
Для максимальної швидкості синтезу білка і розмноження клітин концентрація в них вільних амінокислот повинна досягати 0,1 - 0,2 мМ. Подальше підвищення внутрішньоклітинного запасу амінокислот не дає ефекту. Для зростання невеликої кількості клітин необхідно підвищити концентрацію амінокислот у середовищі і забезпечити накопичування їх в клітинах вище критичного рівня.
На вміст білка в клітинах можуть впливати різні фактори, такі, як тип клітин, щільність популяції і складу живильного середовища. Тому споживання амінокислот при відтворенні клітин може бути різним.
Вітаміни . Для тривалого зростання в культурі клітини потребують 8-ми вітамінах: нікотинаміді, тіаміні, пантотенат, піридоксаль, рибофлавіні, фолієвої кислоти, холін і інозитол. Вони росли з максимальною швидкістю, якщо концентрація цих вітамінів в середовищі була не нижче 10 - 7 - 10 - 8 г/мг.
За винятком холіну і инозитола, потреба клітин у вітамінах, як в організмі, так і в культурі була однаковою. Шість вітамінів є складовою частиною коензимів, що грають важливу роль в метаболізмі клітин. Наприклад, піридоксаль має велике значення в біосинтезі аланіну, серину, гліцину і проліну. При нестачі піридоксалю зміст цих амінокислот у клітинах різко падає, і для підтримки зростання клітин їх слід вносити в середу.
Значення холіну і інозитол в обміні речовин клітин в культурі не з'ясовано, хоча роль їх доводиться дегенерацією клітин при відсутності цих вітамінів. Можливо, вони необхідні культивуються клітинам тільки при певній щільності популяцій.
Є думка, що холін відіграє важливу роль як джерело метильних груп. Інозитол, вітамін В 12 і біотин не завжди були необхідні клітинам.
З жиророзчинних вітамінів найчастіше до складу середовищ включають вітаміни А, Д, Е і рідше К, головним чином з метою підтримки спеціальних функцій і диференціації клітин.
Вуглеводи . При звичайних умовах вирощування клітини отримують енергію головним чином за рахунок гліколізу вуглеводів. В якості енергетичного матеріалу найчастіше використовують d-глюкозу, хоча вона більш-менш ефективно може бути замінена іншими вуглеводами. Гліколіз посилюється з підвищенням інтенсивності розмноження клітин.
Концентрація в середовищі глюкози, так само, як амінокислот впливає на швидкість росту клітин. При культивуванні клітин різного походження виявлена ??деяка специфічність дії простих цукрів, що виявляється в зміні швидкості росту і морфології клітин.
Сироватковий білок . Майже всі культури клітин для підтримки життєдіяльності і зростання вимагає наявності сироваткового білка або його компонентів. Лише деякі спеціально адаптовані або селекціоновані лінії клітин можуть обійтися без сироваткового фактора. Одна з причин невдач вирощування багатьох перевіваемих клітин в синтетичних середовищах, на думку Линга і співр., Полягає в тому, що в таких середовищах на відміну від сироваткових середовищ, низька концентрація амінного азоту.
Відомо, що білки, як такі, не утилізуються клітинами, і тому ростовий фактор сироватки не є протеїном, як таким, а являє собою низкомолекулярное з'єднання. Білки діалізата сироватки крові (щільність gt; 1,21) не змінювали нативної сироватки при вирощуванні клітин печінки кролика в первинній культурі.
Додавання в середу 10% нативної сироватки великої рогатої худоби або інших білків, виділеного із сироватки плоду корів, різко збільшувало синтез ДНК в культурі клітин ембріонів щурів.
Синтез РНК посилювався відразу після зміни середовища і вдруге перед початком синтезу ДНК. Через 48 годин після зміни популяція клітин подвоювалася. Виявилося, що фактор, що стимулює метаболізм і проліферацію клітин, міститься в сироватці великої рогатої худоби.
Присутність в середовищі певного хімічного складу низькомолекулярних і високомолекулярних глікопротеїнів, отриманих із сироватки крові, покращувало ріст клітин ембріонів миші в первинній культурі. Значення сироваткового білка в адгезії клітин з твердим субстратом добре відомо.
У середовищі з сироваткою в початковий період культивування клітини прикріплялися повільніше, але їх кількість постійно збільшувалася, і вони не відділялися від скла. Міцна зв'язок клітин зі склом настає лише в присутність сироватки.
Клітини курячого ембріона менш чутливі до сироваткового фактору зростання, ніж клітини інших тварин [6].
1.5 Поживні середовища і сольові розчини
Середа є одним з найбільш важливих умов при культивуванні клітин і тканин.
