="justify"> Ідеальна середу повинна бути точно визначеної сумішшю хімічних речовин.
За кількістю і якістю компонентів поживні середовища для тканинних культур значно різняться між собою. Вони можуть складатися з компонентів, хімічний склад яких точно відомий. Такі середовища прийнято називати синтетичними.
У цілому клітини організму тварини для свого розвитку потребують природному середовищі або в середовищі, в яку додані деякі природні продукти.
Тому в більшості випадків застосовують синтетичні середовища не як такі, а в суміші з сироваткою або іншими біологічними продуктами. Основу будь-яких поживних середовищ складають розчини неорганічних солей. Поживні середовища різняться між собою не тільки за змістом харчових субстратів, але і за змістом неорганічних солей. Середовища для короткочасного підтримки життєдіяльності клітин мають більш простий склад, ніж середовища, призначені для тривалого розмноження клітин. Склад поживних середовищ може залежати також від характеру культивованих клітин.
Збалансовані сольові розчини містять основні іони приблизно в тих самих кількостях, що й у сироватці крові. Вони забезпечують осмотичний тиск, іонний баланс, рН середовища. Інтегрована функція іонів у метаболізмі клітин виключно велика. Термін «збалансований» означає, що в розчині основні іони містяться у фізіологічних співвідношеннях, а сумарна концентрація їх забезпечує необхідне осмотичний тиск і рН.
Так само як сироватка крові, більшість поживних середовищ має добре збалансовані фосфатно-карбонатні буфери. Такі середовища швидко втрачають СО 2, і тому при їх використанні тканинні культури вирощують в герметично закритих судинах або містять в інкубаторах з підвищеним вмістом СО 2 в атмосфері.
Першим сольовим розчином, призначеним для тканинних культур, був розчин Тироде. Надалі для цієї мети було запропоновано ряд сольових розчинів, які принципово не різнилися між собою щодо забезпечення клітинного росту [9].
В даний час в якості сольовий основи при виготовленні живильних середовищ для культур кліток і тканин ссавців в основному застосовують розчини Хенкса і Ерла. Обидва розчини мають у своєму складі бікарбонатний буфер. Однак тиск СО 2 і буферність розчину Хенкса нижче, ніж розчину Ерла.
Останнім часом з успіхом випробувані комбіновані органічні буфера, середовища яких найбільшої уваги заслуговує НЕРЕS-буфер. Виявилося, що поєднання 2 - 3 органічних буферів ефективно стабілізує рН поживних середовищ на різних рівнях в межах 6,4 - 8,3. Середовища з НЕРЕS-буфером виявилися придатними для вирощування багатьох первинних і перевіваемих клітин, як на склі, так і в суспензії.
Живильні середовища для тканинних культур ссавців. Протягом тривалого часу в якості поживних середовищ для тканинних культур використовували природні рідини організму, змішані з сольовими розчинами. Однак це не завжди задовольняло дослідників зважаючи на складність і нестандартності таких середовищ.
В даний час запропоновано велику кількість синтетичних середовищ, відмінних між собою за кількістю і концентрації компонентів. Наприклад, за кількістю входять до їх складу амінокислот вони розрізняються від мінімального набору і помірній концентрації до максимального набору і високої концентрації. Більшість синтетичних середовищ застосовується разом з сироваткою або різного роду білковими гідролізатами, які є джерелом важливих факторів харчування.
Перший значний успіх у розробці штучних поживних середовищ випав на долю Фішера і Уайта.
За кількістю, що входять до складу компонентів, всі синтетичні середовища можна розділити на «багаті» і «мінімальні».
До багатих середах можна віднести середовища 199, NСТС 109, F - 12, 7С та інші.
До мінімальним середах слід, насамперед, віднести середу Голка, Негл і МВ 752/I. Середа Голка є найпростіших з усіх відомих синтетичних середовищ. Вона складена на основі досліджень, що показали, що для росту і розмноження широкого спектру клітин потрібно щонайменше 13 амінокислот (аргінін, гістидин, ізолейцин, лейцин, лізин, фенілаланін, треонін, триптофан, валін, цистин, метіонін, тирозин, глютамин), 8 вітамінів (тіамін, рибофлавін, холін, пантотенат, інозитол, фолієва кислота, нікотинамід, піридоксаль), глюкоза і 6 неорганічних іонів (натрій, калій, кальцій, магній, хлор, фосфор).
Всі складні синтетичні середовища готують у вигляді ряду основних розчинів, які потім об'єднують разом. Деякі компоненти додають в середу безпосередньо перед застосуванням.
1.6 З'єднання клітин у культурі
Отримання достатньої кількості ізольованих н...
