печінки і т.д.
Робота 53. Визначення вмісту загальних фосфоліпідів у сироватці крові
Метод заснований на визначенні концентрації органічного фосфату, звільнився за кислотному гідролізі. Вимірювання вмісту неорганічного фосфату проводиться реакцією з молибдатом амонію, принцип якої див. роботу 11. p> Реактиви. Трихлороцтової кислота, 0,6 М розчин; реактив молібдату амонію *; хлорне кислота, конц.; Відновлюючий реактив *. p> Обладнання. Фільтрувальний папір; центрифуга з Центрифужна вагами; штатив із пробірками; піпетки для забору концентрованих кислот; піпетки місткістю 0,1; 1 і 5 мл; піщана лазня; ФЕК. p> Матеріал. Сироватка крові. p> Хід визначення. В дослідну пробірку вносять 0,2 мл сироватки і 2,8 мл дистильованої води, в контрольну - 3 мл дистильованої води. Додають в обидві пробірки по 3 мл розчину трихлороцтової кислоти і струшують для перемішування вмісту. p> Центрифугують дослідну пробу 15 хв при 3000 об/хв. Надосадову рідину зливають, пробірку перевертають на фільтрувальний папір до повного стікання рідини. Потім в обидві пробірки доливають по 1 мл концентрованої хлорної кислоти (спеціальної піпеткою, обережно!), Поміщають в кожну з них за дві скляні намистинки і струшують їх вміст. Проби ставлять на гідроліз в піщану баню при 180? С на 20-30 хв (до знебарвлення розчину). p> Пробірки охолоджують на повітрі до кімнатної температури, додають по 3 мл дистильованої води, по 1 мл реактиву молібдату амонію і за 1 мл свіжоприготованого відновлюючого реактиву. Ретельно перемішують вміст пробірок і залишають на 10 хв при кімнатній температурі. p> Фотометрують дослідну пробу проти контрольної на ФЕК при 630 нм (червоний світлофільтр) в кюветі з товщиною шару 0,5 см.
Розрахунок. Вміст загальних фосфоліпідів х (г/л) в сироватці крові розраховують за формулою
m5000? 25
х = ------,
10
де m - маса неорганічного фосфату в пробі, знайдена за калібрувальним графіком (рис. 8), мг;
- коефіцієнт перерахунку на літр сироватки крови;
- коефіцієнт перерахунку міліграмів у грами;
- коефіцієнт перерахунку (ліпідний фосфор становить 4% відносної молекулярної маси фосфоліпідів).
Для перерахунку ліпідного фосфору на ммоль/л необхідно отримані результати помножити на коефіцієнт 0,323.
В
Оформлення роботи. За отриманого значення екстинкції розрахувати вміст загальних фосфоліпідів та ліпідного фосфору в сироватці крові. Зробити висновок щодо отриманих даних. p> Практичне значення роботи. Фосфоліпіди сироватки (плазми) крові входять до складу ліпопротеїдів, обумовлюючи разом з білком полярні властивості цих змішаних макромолекул і їх розчинність. У нормі вміст загальних фосфоліпідів становить 1,5-3,6 г/л, або 2,0-3,5 ммоль/л ліпідного фосфору. Важливим показником є ​​індекс фосфоліпіди/холестерин, який у фізіологічних умовах дорівнює 1-1,5. Цей індекс знижується при атеросклерозі, гіпертонічній хворобі, захворюваннях печінки. Підвищення концентрації фосфоліпідів у сироватці крові (гіперфосфоліпідемія) спостерігається при цукровому діабеті, гіпотиреозі, при ураженні нирок і т.д. Знижений рівень їх зустрічається при важких формах гострого гепатиту, жировому переродженні печінки, тиреотоксикозі. br/>
Робота 54. Поділ ліпідів сироватки крові методом тонкошарової хроматографії
Метод заснований на різній швидкості переміщення ліпідних фракцій сироватки крові (фосфоліпіди, вільні жирні кислоти, холестерин, гліцериди) в тонкому шарі адсорбенту при русі через нього органічного розчинника. Швидкість поділу фракцій залежить від їх відносної полярності, і для їх виявлення отримані хроматограми обробляють парами йоду. p align="justify"> Реактиви. Етанол - діетиловий ефір (3:1); хлороформ; розчинник для хроматографії: н-гексан - діетиловий ефір - оцтова кислота (73:25:2); йод металевий. p align="justify"> Обладнання. Пластинки хроматографічні Силуфол УФ254; камера для хроматографії; водяна баня; камера для прояву хроматограм; хроматоскоп. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Хід визначення. У мірній колбі місткістю 25 мл змішують 1 мл досліджуваної сироватки крові з 10 мл приготовленої спирто-ефірною суміші. Колбу з вмістом поміщають на 30 с в киплячу водяну баню, прохолоджують під струменем холодної води і доводять об'єм спирто-ефірною сумішшю до 25 мл. Отриманий ліпідний екстракт фільтрують через знежирений паперовий фільтр в шірокогорлую пробірку, випарюють досуха у киплячій водяній бані, а осад розчиняють в 0,2 мл хлороформу. p align="justify"> У хроматографическую камеру наливають 2-3 мл розчинника. Пастерівської піпеткою наносять на хроматографическую пластину, відступивши 1 см від краю, 0,01-0,02 мл хлороформного екстракту, поміщають пластину в камеру цим кінцем вниз, зануривши його на 3-5 мм в розчинник. Камеру закривають кришкою для підтримки рівномірної концентрації парів. Хроматографію проводя...
