алкоголем.
Робота 51. Визначення вмісту ? - і пре- ? - ліпопротеїдів сироватки крові турбидиметричним методом за Бурштейн і Самай
Реактиви. Хлорид кальцію, 0,025 М розчин; гепарин, що містить 1000 одиниць на 1 мл. p align="justify"> Обладнання. Мікропіпетки; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на здатності гепарину утворювати з ? - і пре- ? - ліпопротеїдами сироватки крові комплекс, який під дією хлориду кальцію випадає в осад. Ступінь помутніння розчину пропорційна вмісту цих ліпопротеїдів у сироватці крові.
Хід визначення. У контрольну і дослідну кювети ФЕКа з товщиною шару 0,5 см наливають по 2 мл хлориду кальцію. Встановлюють шкалу приладу на нульову позначку при 720 нм (червоний світлофільтр). p align="justify"> В дослідну кювету доливають мікропіпеткою 0,2 мл сироватки, кілька разів промиваючи піпетку. Відзначають вихідне значення екстинкції (Е1). Потім додають мікропіпеткою 0,04 мл гепарину, кілька разів промиваючи її, і перемішують вміст кювети. Рівно через 4 хв (за секундоміром) знову вимірюють екстинкцію (Е2). p align="justify"> Розрахунок. Вміст ? - і пре- ? - ліпопротеїдів х (г/л) в сироватці крові розраховують за формулою
х = (Е2 - Е1) 11,65,
де 11,65 - емпіричний коефіцієнт перерахунку змісту ? - і пре- ? - ліпопротеїдів на г/л.
Оформлення роботи. За отриманими значеннями екстинкції розрахувати вміст визначаються ліпопротеїдів у сироватці крові і зробити висновок про можливі їх зміни. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст ліпопротеїдів в сироватці крові становить 3,6-6,5 г/л. Найбільш часто спостерігається збільшення вмісту ? - ліпопротеїдів у сироватці крові. Підвищення рівня ліпопротеїдів тісно пов'язане з підвищенням вмісту холестерину в крові; їм найбільш багаті ? - ліпопротеїди. Підвищення ? - і пре- ? - ліпопротеїдів має місце при захворюваннях, пов'язаних з порушенням ліпідного обміну (атеросклероз, цукровий діабет тощо). Концентрація ? - і пре- ? - ліпопротеїдів в сироватці крові має значення не тільки для виявлення порушень ліпідного обміну, але і як показник функції печінки (гепатити).
Робота 52. Визначення вмісту холестерину в сироватці крові за методом Ілька
Реактиви. Реактив Ілька *. p align="justify"> Обладнання. Піпетка для відмірювання концентрованих кислот; термостат, відрегульований на 37? С; мікропіпеткі; штатив із пробірками; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на реакції Лібермана-Бурхарда (див. роботу 18, б). Інтенсивність смарагдово-зеленого забарвлення пропорційна вмісту холестерину. p align="justify"> Хід визначення. У пробірку вносять 2,1 мл реактиву Ілька і доливають 0,1 мл негемолізірованной сироватки крові, яку додають повільно, так щоб вона скла по стінці пробірки. Пробірку енергійно струшують 10-12 разів і поміщають у термостат на 20 хв при 37? С. Фотометрують на ФЕК при 630-690 нм (червоний світлофільтр) в кюветі з товщиною шару 0,5 см проти реактиву Ілька. p align="justify"> Розрахунок. Зміст холестерину визначають за калібрувальним графіком (рис. 7). p align="justify"> Примітка. При проведенні реакції потрібно користуватися абсолютно чистими і сухими пробірками і піпетками. Співвідношення компонентів реактиву Ілька розраховане так, що білки сироватки крові не випадають в осад. Поява каламуті може бути викликане лише наявністю води в реактиве або посуді. br/>В
Оформлення роботи. Розрахувати вміст холестерину в досліджуваній сироватці крові та за результатами зробити висновок про можливі порушення в обміні холестерину. p> Практичне значення роботи. Вміст холестерину в сироватці крові у здорових людей, визначене методом Ілька, становить 3,0-6,2 ммоль/л. Підвищена концентрація холестерину в сироватці крові (гіперхолестеринемія) спостерігається при атеросклерозі, цукровому діабеті, вроджених порушеннях обміну, захворюваннях...
