ть при кімнатній температурі до тих пір, поки фронт розчинника не наблизиться, до верхнього краю, не доходячи до нього 0,5 см.
Отриману хроматограму витягують з камери, висушують на повітрі і вносять в камеру для прояву, на дно якої попередньо насипають кристали металевого йоду. Посудина закривають і підігрівають у водяній бані при 60? С. Возгоняются йод вступає в реакцію з ліпідними фракціями. p align="justify"> Через 1 хв хроматограму витягують і переглядають в ультрафіолетовому світлі на хроматоскопе. Фракції ліпідів виявляють у вигляді коричневих плям. Ближче до лінії старту розташовані фосфоліпіди, потім неідентифіковані з'єднання, холестерин, моногліцериди, вільні жирні кислоти, тригліцериди та ефіри холестерину. p align="justify"> Оформлення роботи. Замалювати отриману хроматограму, вказавши на ній відповідні ліпідні фракції сироватки крові. Вказати у висновках можливість подальшого кількісного визначення ліпідних компонентів. br/>
ОБМІН БІЛКІВ І АМІНОКИСЛОТ
В обміні білків можна умовно виділити два етапи: перший - розпад білків (у тому числі апопротеинов складних білків) до амінокислот і другий перетворення амінокислот до кінцевих продуктів метаболізму (сечовина, СО2 і Н2О) або до деяких азотовмісних похідних (біогенні аміни, креатин, порфіріни і т.д.). Для оцінки стану білкового обміну організму досліджують вміст білків та окремих їх фракцій у сироватці крові, амінокислот, а також активність ферментів, які каталізують окремі стадії перетворення білків та амінокислот. br/>
Робота 55. Визначення вмісту білкових фракцій сироватки крові турбидиметричним методом
Реактиви. Основний фосфатний буферний розчин і його робочі розчини № 1-4 *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1; 2,5 і 10 мл; палички скляні; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на здатності окремих білкових фракцій сироватки крові осідати у вигляді дрібної суспензії в фосфатних розчинах певної концентрації. Ступінь каламутності розчину пропорційна вмісту білкових фракцій. p align="justify"> Хід визначення. Нумерують шість пробірок: 0, 1, 2, 3, 4, 5 і ставлять їх у штатив. У пробірку В«0В» (контрольна) вносять 5 мл дистильованої води, а в пробірки 1-4 по 5 мл відповідних робочих буферних розчинів. p align="justify"> У пробірку № 5 наливають 0,5 мл сироватки крові, 0,75 мл дистильованої води і 3,75 мл основного розчину фосфатного буфера, вміст ретельно перемішують.
З пробірки № 5 переносять 0,5 мл в контрольну пробірку і по 0,5 мл у пробірки № 1-4, після чого вміст їх перемішують скляною паличкою.
Через 15 хв визначають ступінь каламутності (екстинкцію) розчинів № 1-4 проти контрольної (нульова проба) на ФЕК при 610-640 нм (світлофільтр червоний) в кюветі з товщиною шару 1 см (перед фотометрією пробірки струшують).
Розрахунок. Підібрані концентрації розчинів фосфатного буфера дозволяють осаджувати різні фракції білків в залежності від їх ізоелектричної точки. У пробірці № 1 осідають всі фракції; № 2 - всі фракції глобулінів; № 3 - ? - і ? - глобуліни та № 4 - тільки ? - глобуліни . Виходячи з цього, розраховують вміст окремих білкових фракцій у відсотках або в абсолютних величинах (в г/л).
У відсотках розрахунок проводять наступним чином. Обчислюють Е для кожної фракції:
для альбумінів Е = Е1 - Е2;
для ? - глобулінів Е = Е2 - Е3;
для ? - глобулінів Е = Е3 - Е4;
для ? - глобулінів Е = Е4
Отримані значення Е для кожної білкової фракції складають і умовно приймають за 100%, після чого знаходять зміст для кожної фракції х (у%) за формулою
Еоп 100%
х = -----,
Еобщ
де Еоп - екстинкція даної фракції,
Еобщ - сума екстинкції всіх фракцій.
Для розрахунку вмісту білкових фракцій в абсолютних значеннях попередньо визначають концентрацію білка в сироватці крові біуретовим методом (див. роботу 8) і потім роблять розрахунки за формулою
Еоп З
х = -----,
Еобщ
де х - зміст даної фракції, г/л;
С - концентрація білка в сироватці крові, певна біуре...
