епошкоджених клітин з метою культивування виявилася складним завданням. На результатах дезагрегації тканин позначалися багато факторів, пов'язані як з самими тканинами (вид, вік, фізіологічний стан донора, специфічність тканини), так і з умовами виділення клітин. Збільшення виходу і підвищення життєздатності клітин залежало від знання найбільш ефективних засобів режимів дисоціації тканин на складові клітинні елементи.
Для пояснення природи сил, що утримують клітини щодо один одного, запропонований ряд гіпотез. Найбільш міцне з'єднання клітин можуть забезпечити прямі хімічні зв'язки (водневі, ефірні, імінну, амідні) завдяки комплементарному розташуванню активних груп (-ОН, - NН 2 і - SН) або іонів на поверхні суміжних клітин. Існує думка, згідно з яким на молекулярному рівні контакти всіх типів клітин однакові, а специфічність взаємодії різних типів клітин визначається розташуванням комплементарних груп на їх поверхні. Маючи однаковий заряд (негативний), клітини повинні відштовхуватися один від одного, насправді ж вони притягуються один до одного.
Існуючі факти змусили припустити наявність сил тяжіння, які долають електростатичні сили відштовхування. Зі збільшенням відстані між клітинами сили тяжіння убувають повільніше, ніж електростатичні сили відштовхування. Сили взаємного тяжіння зростають зі збільшенням подібності у структурі поверхні клітин. На підставі даних літератури та власних досліджень з тканинами ембріонів Картіс висловився на користь фізичних сил (Ван-дер-Ваальса-Лондона), що лежать в основі міжклітинних зв'язків. Аналогічні дані були отримані іншими авторами.
Ослаблення міжклітинних зв'язків при видаленні або зв'язуванні кальцію або інших двовалентних катіонів породило гіпотезу про важливе значення кальцієвих містків у зв'язуванні клітин між собою. Є також дані, що вказують на більш істотну роль калію в поєднанні клітин в порівнянні з кальцієм.
Багато дослідників віддавали перевагу ідеї, згідно з якою між ліпопротеїновими мембранами клітин знаходиться «міжклітинний цемент». Електронна мікроскопія надала докази на користь наявності простору між клітинними мембранами, заповненого особливою речовиною. Виявлення міжклітинних речовин у різних тканинах призвело до думки, що саме вони відповідальні за адгезію клітин. Незважаючи на те, що в багатьох тканинах клітини розташовані дуже тісно і між ними залишається невеликий простір, з'ясовне міжмолекулярними зв'язками або фізичними силами взаємодії, припущення про міжклітинному цементі не розвіявся. До певної міри цьому сприяла дисоціація тканин різними протеолітичнимиферментами, в результаті якої отримували життєздатні клітини. У цих випадках дисоціація тканин ферментативним шляхом відбувається завдяки руйнуванню хімічних зв'язків між «цементом» і поверхнею клітин.
Механізм з'єднання клітин в тканини може сильно відрізнятися в залежності від типу тканини, віку тварини, а також може бути різним у клітин нормальних і злоякісних тканин [2].
Відомо, що протеолітичні ферменти діють головним чином на мертві клітини і надають незначну дію на життєздатність клітини.
Зміни хромосом в живих клітинах при тривалій інкубації в трипсин пов'язані з порушенням проникності клітинних мембран.
Ідеально диспергуючі речовина повинні діяти вибірково на міжклітинні речовини і не повинні проникати в клітини. Адсорбируясь на клітинній мембрані, ензим може гідролізувати заново синтезується кліткою мукопротєїновиє покриття. При цих умовах клітка може виснажити свої синтетичні механізми і втратити в силу підвищеної проникності запаси важливих метаболітів, перш ніж вона відновить свою цілісність і проникність, необхідні для нормальної життєдіяльності в культурі [3].
Таким чином, збереження або відновлення нормальної проникності клітин є критичним фактором успішного виділення клітин, що володіють високою життєдіяльністю.
Для виділення життєздатних клітин з тканин тварин застосовують ферментативне перетравлення, механічне розщеплення, обробку речовинами, що зв'язують двовалентні катіони, та інші впливи.
1.7 Первинні культури
До первинних культурам належить, насамперед, культура тканинних експлантатов і органів. Це один з найбільш ранніх методів тканинних культур, що застосовуються до теперішнього часу. У такій культурі в основному зберігається життєздатність клітин, і лише в дослідах з деякими органами і тканинами ембріонів буває виражена проліферація клітин і диференціація тканин. Останнім часом для різних цілей стали застосовувати суспензії свіжо ізольованих клітин. Цей метод відрізняється від попереднього тим, що не тканини, а їх складові елементи - клітини вирощують в товщі живильного середовища. Суспензія свіжо ізольованих кл...
