омів для отримання надтонких зрізів за допомогою ультратомов, або ультрамікротомов. Ультрамікротоми - апарати для автоматичного приготування надтонких зрізів тканин запрограмованої товщини (5-10 нм). Це потрібно, тому що пучок електронів, проходячи через більш товсті об'єкти, поглинається, викликає нагрівання і призводить до деформації препарату. Процедура їх задоволена схожа з аналогічною для світлової мікроскопії. Спочатку клітини фіксують, часто використовують ГА (глутаровий альдегід), а потім OsO 4, хоча буває і застосування їх окремо. Потім здійснюють проводку з останнім етапом - зануренням у ксилол. Після препарат заливають епоксидною смолами (Епон). Тепер препарат, укладений у тверді блоки можна різати за допомогою скляних або алмазних ножів для виготовлення зрізів настільки малої величини використовують термічну подачу об'єкта. Потім йде забарвлення препарату, зазвичай уранілацетатом і нітратом свинцю, які контрастують позитивно. Ця техніка виготовлення відкрила величезні можливості для застосування електронної мікроскопії майже у всіх областях біології та медицини.
Можливо проводити дослідження методом радиоавтографии з використанням сверхтонкозерністих емульсій і величезних експозицій. А також досліджень без фіксації і ув'язнення в Епон методом кріоультрамікротоміі. У цьому випадку об'єкт моментально заморожують до температури рідкого азоту, вода переходить у склоподібний стан, а процеси моментально гальмуються. Отримані таким чином зрізи використовують в імунохімічних досліджень і т.д.
Для вивчення структури мембранних компонентів використовують метод заморожування-сколювання. Метод схожий на попередній: об'єкт моментально охолоджується до температури рідкого азоту, а потім сколюється охолодженим ножем. Поверхня шару покривають шаром металу та вуглецю, а потім розчиняють об'єкт і отримують репліку з поверхні відколу. При цьому можна досліджувати рельєф поверхні мембран.
.3 Метод високовольтної мікроскопії
Прискорююча напруга такого мікроскопа складає 1-3 млн вольт. Така напруга дозволяє розглядати об'єкти більшої товщини (1-10 мкм), а використовую стереоскопічну зйомку, ми можемо отримати інформацію про 3D організації внутрішньоклітинних структур з високим дозволом.
.4 Метод скануючої (растрової) електронної мікроскопії
При використанні цього методу об'єкт покривається тонким шаром випаруваного металу, відбиваючись від якого, зонд (пучок електронів) потрапляє в приймальний пристрій, звідки далі передається сигнал. При цьому виходить практично тривимірне зображення поверхні досліджуваного об'єкта, завдяки дуже великій глибині фокуса. Також можна отримати інформацію про хімічний склад клітин.
3. Світловий і електронний мікроскопи
.1 Будова світлового мікроскопа і його основні характеристики
Щоб зрозуміти принцип роботи світлового мікроскопа, необхідно розглянути його будову.
Головний прилад біології є оптичною системою, яка складається з штатива, освітлювальної та оптичної частини. У штатив входять черевик; предметний столик з тримачем предметного скла і двома гвинтами, що переміщають столик у двох перпендикулярних напрямках; тубус, тубусодержатель; макро-і мікрогвинти, передвигающие туб...
