етод радиоавтографии
Даний метод використовується для виявлення локалізації місць синтезу біополімерів, визначення шляхів перенесення речовин в клітині, спостереження за міграцією або властивостями клітин. Для цього застосовують реєстрацію речовин, мічених ізотопами. Спосіб повторює метод Беккереля. У середу з клітинами вводиться попередник одного з речовин, в якому один з атомів заміщений а радіоактивний ізотоп. У процесі синтезу мічений атом потрапить в саму молекулу і її можна буде зареєструвати за допомогою фотоемульсії. Точність цього методу залежить від величини зерна AgBr і від енергії частинки. Тому для методу радиоавтографии використовують спеціальну дрібнозернисту фотоемульсію та ізотопи з малою енергією. Радіоавтографіческі не можна вивчати розчинні у воді сполуки, тому що атоми можуть загубитися.
.7.5 Метод молекулярної гібридизації
Застосування попереднього методу спільно з методом радиоавтографии дає нам можливість локалізувати на хромосомі місця з певною нуклеотидной послідовністю або навіть розташування певних генів. Для цього розчин з міченої нуклеїнової кислотою наносять на препарат з денатурованої ДНК у складі хромосом або ядер. У процесі ренатурації ДНК утворюється гібрид меченной нуклеїнової кислоти і комплементарним ділянкою вихідної ДНК. Місце такого зв'язку реєструється радіоавтографіческі. Також метод застосовується при фарбуванні нуклеїнової кислоти флуорохромами. Це означає, що ми можемо визначити положення будь-якій послідовності ДНК.
2. Електронна мікроскопія
Оскільки питання підвищення дозволу завжди стояло гостро, вчені прийшли до висновку, що в світловій мікроскопії підвищити дозвіл можна тільки за рахунок використання джерела світла, який випускає хвилі з найменшою довгою. Таким джерелом може бути розпечена нитка, що викидає потік електронів, який можна сфокусувати, пропускаючи через магнітне поле. На основі цього був створений світловий мікроскоп. В даний час розрізняють просвічує електронну мікроскопію (ПЕМ) і растрову електронну мікроскопію (РЕМ). Далі будуть розглянуті методи електронної мікроскопії.
.1 Контрастування корпускулярних об'єктів
Існує кілька методів контрастування. Я розгляну два з них: негативний контрастування і оттенение металами. Негативний контрастування роблять за допомогою ФВК, молібденовоскіслого амонію, уранілацетатом. після нанесення розчину на досліджуваний об'єкт, потім нанести на плівки-підкладки і висушити, то досліджуваний об'єкт буде занурений в аморфну ??речовину високої щільн?? Сти. Це призведе до того, що на знімках вони виглядатимуть як білі об'єкти на темному тлі. Розчини можуть також проникати вглиб досліджуваного об'єкта і виявляти приховані структури. Також існує метод позитивного контрасту. У цьому випадку використовуються солі важких металів, які підвищують електронну щільність об'єкта, таким чином, контраст його підвищується. Відтінення металами - при термічному випаровуванні металів їх частинки розлітаються і осідають на досліджуваному об'єкті у вигляді шару, чия товщина варіюється залежно від напрямку польоту частинок. У місцях, де екранує пучок частинок, простір буде темніше.
2.2 Ультрамікротомія
Ультрамікротомія являє собою сукупність прий...
