рилу з буферним розчином, що містить в якості одного з компонетов триетиламін, які мають pH 5,0.
Вихідний розчин для приготування рухомої фази - 2,5 М розчин фосфорної кислоти, який титровали триетиламіном до рН 5,0. Буферний розчин для ВЕРХ отримували розведенням вихідного розчину водою в 10 раз.750 мл отриманого буферного розчину змішували з 250 мл ацетонітрилу. При цьому значення удаваного рН рухомої фази підвищувався до 5,7. Швидкість рухомої фази 1 мл / хв. Хроматографування проводили при кімнатній температурі. Час аналізу 20 хв.
Оскільки входять до складу препарату компоненти розрізняються за кислотно-основних властивостей - БП є кислотою, а новокаїн і бензатин - підставами, при збільшенні рН їхні часи утримування в інтервалі рН, де їх іонізація змінюється, зсуваються в різні сторони. Тому шляхом зміни рН легко підібрати зручне втримання аналізованих компонентів. Однак збільшення рН призводить до помітного погіршення форми піку бензатину, а зменшення - до недостатнього вирішенню новокаїну і продуктів гідролізу БП. Поділ компонентів бициллина - 3 при зазначених вище умовах представлено на малюнку. Часи утримування новокаїну, бензатину і БП становили 4,2, 11,6 і 14,8 хв відповідно.
Істотним є вихід піку новокаїну між 2 піками, що представляють собою продукти гідролізу БП. У зв'язку з цим для кращого поділу компонентів рекомендується додавати в рухому фазу невеликі кількості 2,5 М розчинів фосфорної кислоти або триетиламіну і контролювати поділ хроматографування суміші новокаїну і БП, розчин якого зберігався близько доби при кімнатній температурі.
Для кількісного визначення 20-25 мг бициллина - 3 вносили в мірну колбу місткістю 100 мл і розчиняли в 20% водному розчині ацетонітрилу. Використання для розчинення метанолу або його розчинів вело до часткового метилированию БП. Збільшення концентрації ацетонітрилу призводило до розширення піку новокаїну. Верхня межа концентрації лікарської речовини обмежений його розчинність. Калібрувальні графіки для БП і бензатину отримували з використанням натрієвої солі БП і діацетату бензатину після відповідного перерахунку. Калібрувальний графік для БП линеен в області 0,1-0,5 мг / мл, для бензатину і новокаїну - в області 0,01-0,05 мг / мл. Результати визначення компонентів в 5 серіях препарату представлені в табл.1, де кожне значення являє собою середнє з 5 визначень. Відносне середнє квадратичне відхилення склало 1,6% для новокаїну, 3,4% для бензатину і 1,4% для БП.
З табл.1 випливає, що результати кількісного визначення за допомогою ВЕРХ укладаються в допустимі межі, регламентовані НД.
Для підтвердження правильності запропонованої методики були проаналізовані компоненти бициллина - 3 в модельних сумішах, приготованих змішанням натрієвої солі БП, бензатину діацетату і новокаїну. Результати наведені в табл.2. Результати перераховані на вихідні компоненти.
Кожне значення в графі «Знайдено» табл.2 - середній результат 3 визначень. Середня величина відносного відхилення склала 2,2% для бензатину, 0,9% для новокаїну і 0,8% для БП, що корелює з відносними середніми стандартними відхиленнями, знайденими при аналізі компонентів в реальних пробах. Для бензатину розкид результатів дещо вище, ніж для решти компонентів, що пояснюється низькою висотою і неправил...
