покритонасінних и голонасінніх Рослін, Папороть, мохам, печеночникам. Первинний калуса, что виник на експланті через 4-6 тіжнів (залежних від швідкості зростанню клітін), переноситися на свіжу жівільну середу (субкультівіється). Розмір трансплантації при культівуванні на агарізованому жівільному середовіщі зазвічай становіть від 60 до 100 мг масі тканини на 30-40 мл жівільного середовища. Таким чином, техніка культівування тканин рослин дозволяє отріматі трівалу пересадочних калусніх культуру з будь-якіх живих тканинних клітін інтактного рослини. Клітини різному діфференціруваті (у тому чіслі и меристематические) переходять in vitro до складного процесса дедіференціації, втрачають притаманне Їм структурних організацію и спеціфічні Функції и індукуються до справжньої, утворюючі первинний калуса. [8] У процессе субкультування формується штам, характерізує індівідуальнімі генетичними и фізіологічнім можливіть. При культівуванні рослинних клітін и при вірощуванні культури тканин застосовуються середовища Мурасіге - Скуга, Нагата - Такебе, Хеллера, Нича-Нича, Кнудсон та Інші в різніх модіфікаціях. Основними компонентами пожівніх СЕРЕДОВИЩА для культури клітін и тканин рослин є мінеральні СОЛІ (макро-і Мікроелементи), джерело вуглецевого живлення (зазвічай сахароза або глюкоза), вітаміни, регулятори росту. Іноді до складу пожівніх СЕРЕДОВИЩА включаються комплексні Органічні добавки (гідролізат казеїну або суміш амінокіслот, дріжджовій екстракт, екстракти з різніх ОРГАНІВ рослин).
Методи вирощування культури калусніх тканин
Поверхнево культівування. Культура калусніх тканин вірощується Поверхнево способом на напіврідкому агарізованому середовіщі (концентрація агару - 0,6-1%), де Із ЗАСТОСУВАННЯ других желюючіх полімерів або на містках з фільтрувального паперу або дисках з пінополіуретану, Занурення у рідке жівільне середовище. Калусна тканина, что вірощується Поверхнево способом, представляет собою аморфну ???? масу тонкостінніх паренхімніх клітін, что НЕ має чітко візначеної анатомічної структурою. Колір масі может буті білим, жовтуватім, зеленим або червоним; пігментованім Повністю або зонально.
Малюнок 3.4-Культівування калуса на жівільному середовіщі.
залежних від походження и умів вирощування калусніх тканини бувають:
) пухкімі, сильно обводнених, легко розсіпається на ОКРЕМІ Клітини,
) середньої щільності, з добро віраженімі меристематические Вогнище;
) щільнімі, Із зонами редукуватіго камбію и судину.
Як правило, в трівалій пересадковою культурі, на середовище, де є ауксині, особливо синтетичний аналог ауксину - 2,4 - дихлор-феноксиуксусной кислоту (2,4 - Д), калусні тканини втрачають пігментацію и стають більш пухкімі. У ціклі вирощування калусні Клітини после низькі поділів проходять звічайній для Клітини рослин онтогенез: смороду пріступають до зростання розтягуванням, потім діференціюються як зрілі калусніі Клітини І, Нарешті, деградують. Калусні Клітини, вірощувані Поверхнево способом, часто застосовують для Збереження в ЗРОСТАЮЧИЙ стані колекцій різніх штамів, ліній, мутантів, для регенерації рослин, з них такоже Виходять суспензії клітін, культівованіх в рідкому жівільному середовіщі. [4]
Суспензійне культівування. Культури клітін рослин, что вірощуються в рідкому жівільному середовіщі, зазвічай назівають суспензійного культурами. Термін цею НЕ є строго науковим и точно, так як НЕ пояснює Основний Особливостігри поведінкі клітін при такому вірощуванні. Отримай ще порівняно мало культур клітін Вищих рослин, за своими параметрами Повністю задовольняють Вимогами суспензіоного (глибино) культівування. Значний мірою це ґрунтується труднощамі Отримання культури клітін, что складається перевага Громадської з окремим клітін або Невел?? ких їх агрегатів. Безумовно, вирощування клітінніх суспензій в рідкій жівільної середи має ряд Перевага перед ВИРОЩУВАННЯ калусніх клітін Поверхнево способом. Суспензійні культури зручніше для проведення біохімічніх и молекулярно-біологічних експеріментів - Вивчення індукції ферментів и зв язку їх з подіямі клітинного циклу, експресії та репресії питань комерційної торгівлі генів, ізолювання и характеристик мутантів. Суспензійну культуру можна отріматі з фрагментів органу рослини (диски запасаючої паренхімі м ясістіх коренів моркви, петрушки, бульб картоплі та ін), проти цею шлях більш трудомісткій и требует БІЛЬШОГО годині. Клітини експланті повінні при цьом утворюваті первинний калуса, и только после цього поверхневі калусні Клітини, что попал в рідку середу и розмножила в ній, дадуть качан Лінії, здатної рости в суспензії. Зазвічай для Отримання культури клітін вікорістовується культура калусной тканини. Пухкі обводнені культури калусніх тканин більш прідатні для переведення в суспен...
