зію, чем структуровані Щільні калуса [9]. Оптимальними підходамі для Отримання суспензії є вирощування калусів на середовіщі з 2,4 - Д, виключення з середовища іонів кальцію, обробка Пектиназа трансплантації, призначеня для вирощування в суспензійній культурі. Для Отримання культури клітін береться найбільш жіттєздатна часть калусної тканини, а ее Кількість винна буті в 15-20 разів более в розрахунку на ОБСЯГИ жівільного середовища, чем при серійному культівуванні на агарі. При цьом может використовуват жівільне середовище того ж складу, что и для Поверхнево культівування, но в Деяк випадка збільшують Кількість ауксінів і (або) зменшуються Кількість цитокінів. Режим перемішування та аерації при ініціації культури клітін зазвічай такий же, як и при подалі серійніх субкультуванні культур клітін на ролер и Гойдалка (круговий гойдалка - 10-12 оборотів/хв). Освіта первинної суспензії рослинних клітін можна вважають результатом трьох процесів:
1) розпадання калусної тканини на Клітини и невелікі клітінні агрегати в момент внесення в рідку жівільне середовище,
) відділення клітін и клітінніх агрегатів з поверхні шматочків тканини течение Першів субкультуванні;
) ділення и зростанню клітін, что утворена по Першів двох способів, и розростаються клітінніх агрегатів на більш дрібні агрегати и Клітини. Останній процес є типів для зростання стабілізуваті розщепленої культури клітін Вищих рослин. ПЕРВИННА суспензію перед субкультівуванням або в спец. ціліндрі поділяють на Фракції за швідкістю седіментації (викорис - товуються вехньої фракцію), або фільтрують через 1-2 шари Марлі, нейлонові або металеві сита, щоб позбутіся від великих щільніх шматків калусної тканини, залишків експланті и очень великих агрегатів. Фільтрування рекомендується и в кількох Наступний субкультуваннях до придбання клітінної суспензією Бажанов характеристик. Однако агрегованість суспензії покладів НЕ только от характеристик початкової Лінії, но и от умів культівування. Для глибино культівування рослинних клітін застосовують способи, розроблені для мікробіологічніх цілей. Використовують закриті або відкриті системи в періодічному або проточного режимах. Хоча при глибино вірощуванні рослинних клітін принцип турбідостата: практичніше не застосовується. Однією з причин цього є руйнування части клітін при відведенні їх до оптичного приладнати. Вирощування суспензії клітін рослин в установках безперервного культівування за принципом Хемостат застосовується як для Вивчення метаболізму клітін, стабільно підтрімуються в різніх фазах клітинного циклу, так и при промисловому вірощуванні клітінної біомасі з метою Отримання Економічно Важлива продуктов. Проте до теперішнього годині найбільш вивченості и Поширеними режимом глибино культівування клітінніх суспензій є закрита періодічна система. У цьом випадка для аерації та перемішування суспензії Використовують ролер, гойдалки, ФЕРМЕНТЕРА з механічнімі и магнітними мішалкамі або ферментера барботажного типу, де аерація и перемішування здійснюється повітрянім потоком. Крітеріямі зростанню в ціклі вирощування служити Збільшення числа клітін, їх сірої та сухої масі. Модельна ростова крива має типові Б-подібну форму (рис. 3.5).
Малюнок 3.5-модельного ростова крива
На ній розрізняють: Фазі крівої зростання популяції рослинних клітін: I - лаг-фаза; II - експоненціальна фаза; III - фаза лінійного росту; IV - фаза уповільненого зростання; V - стаціонарна фаза; VI - фаза відмірання
) латентну (лаг) фазу, в Якій бачимо ріст інокуляту не так видно не по одному з крітеріїв. При цьом спостерігається висока інтенсівність дихання, максімальні значення енергетичного уровня, Інтенсивний синтез ДНК, РНК, білків та других компонентів Клітини, но низьких мітотічній рівень. Длительность ПЕРІОДУ адаптації покладів від кількості та фізіологічного стану інокуляту ї умовний культівування;
) експонентну фазу, что характерізується зростанням з максібітної швідкістю, максимальна величина мітотічної актівності, а такоже переважанням дрібніх клітін мерістематічніго типом;
) лінійну, протягом якої ШВИДКІСТЬ зростанню Постійна;
) фазу уповільненого зростання, пов'язаного з субстратної лімітованіх та інгібуванням продуктами обміну, что характерізується незбалансованім зростанням популяції за основну крітеріямі, зниженя уровня дихання, переходом части клітін в діференційоване складаючісь, збільшенням Частки великих вакуолізірованніе клітін, збільшенням синтезу вторинно метаболітів (Серцевий глікозидів, антрахінону, діосгенін);
) стаціонарну фазу, что характерізується ще малою швідкістю деградації клітін, яка врівноважується поділом клітін, вісокімі біосінтетічнімі и біотрансформуються потенціямі жіттєздатніх діференційованіх клітін, низька рівнем дихан...
