роведення повторного та остаточного обліку результатів реакції через 24 год, при цьому скла зберігають у вологій камері або в ексикаторі з вологою атмосферою.
Реакція непрямої гемаглютинації (РНГА)
Дослідження сироватки хворого в реакції непрямої (пасивної) гемаглютинації є допоміжним методом діагностики менінгококової інфекції і дозволяє істотно збільшити відсоток лабораторного підтвердження генералізованих форм менінгококової інфекції. Для отримання достовірного результату обов'язковою умовою є дослідження сироваток крові хворого в динаміці, тобто взятих в різні терміни захворювання (на 1-й і 10 - 12-й дні хвороби).
Відповідно до наказу МОЗ Росії від 23 грудня 1998 року № 375 «Про заходи щодо посилення епідеміологічного нагляду та профілактики менінгококової інфекції і гнійних бактеріальних менінгітів» РНГА можна виконувати як макро- так мікрометодом за дотриманням співвідношення інгредієнтів.
Однією з модифікацій микрометода є постановка РНГА в полістиролових пластинах з об'ємом лунок не менше 300 мкл з використанням автоматичних дозаторів на 50 і 100 мкл.
Необхідні реагенти: діагностикуми еритроцитарні менінгококової полісахаридні серогрупп А і С; досліджувана сироватка, розведена 1: 5; забуферений фізіологічний розчин (ЗФР).
Приготування ЗФР: в 0,5 л дистильованої води розчиняють NaCl - 8,65 г, Na2HPO4? 12Н2O - 1,92 г, КН2РO4 - 0,44 м Об'єм розчину доводять до 1 л дистильованою водою і перевіряють рН розчину, який повинен бути рівний 7,2.
Хід дослідження: два ряди полистироловой пластини (для виявлення антитіл до менингококкам серогрупп А і С) заповнюють по 100 мкл ЗФР, потім проводять дворазове титрування досліджуваної сироватки з розведення 1: 5. У кожен ряд додають по 50 мкл відповідного диагностикума. Пластину струшують і поміщають у термостат на 2,0 - 2,5 год при 37 ° С, після чого враховують результати. Обов'язковими контролями служить відсутність спонтанної аглютинації диагностикума і досліджуваної сироватки. Для цього до 100 мкл диагностикума додають 50 мкл ЗФР, а до 100 мкл сироватки - 50 мкл 1% -х еритроцитів барана. Облік результатів РНГА проводять по четирехкрестной системі. Чотириразове і більше наростання титру специфічних антитіл у процесі хвороби служить підтвердженням діагнозу.
Методи визначення лікарської чутливості
Методи визначення чутливості мікроорганізмів підрозділяють на методи серійних розведень і дифузні методи. Методи серійних розведень в бульйоні і агарі засновані на прямому впливі антибактеріального препарату (АБП) і кількісному визначенні мінімальної переважної концентрації (МПК) антибіотика стосовно досліджуваного мікроорганізму. Їх частіше використовують при проведенні науково-дослідних робіт.
Дифузійні методи засновані на придушенні росту досліджуваної культури, при дифузії з носія антибактеріального препарату в щільну живильне середовище. Існують дві модифікації дифузійного методу: діскодіффузіонним і Е-тест.
діскодіффузіонним метод - кач?? ственний метод. Він дозволяє віднести за ступенем чутливості до антибіотика досліджуваний мікроорганізм до чутливих, помірно стійким і стійким штамів. Завдяки простоті виконання він є основним для практичних лабораторій. Е-тест - кількісний метод, що безпосередньо визначає МПК антибіотика. Показання для дослідження чутливості мікроорганізмів до АБП, практичне використання методів детально відображено в методичних вказівках по контролю МУК 4.2.1890-04 «Визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів».
Поширення отримали тест-системи для визначення лікарської чутливості, в основі яких лежить метод мікророзведень антибіотиків. Це дозволяє стандартизувати підготовчі етапи дослідження, оцінювати результат візуально або із застосуванням різних автоматизованих систем. Одним з різновидів методу серійних розведень є метод, заснований на використанні двох концентрацій антибіотика відповідають граничним значенням МПК. Така тест-система являє собою пластикову смужку з розташованими на ній двома рядами лунок. Кожен антибактеріальний препарат, представлений на смужці, у першій лунці містить «малу» порогову концентрацію ліофілізованого антибіотика, а в другій лунці «велику» порогову концентрацію. Перша пара лунок не містить антибіотик і служить для контролю росту досліджуваної культури. Остання пара лунок потрібна для додаткового тестування культури на чутливість до препаратів, що не входять в набір системи. Результат оцінюють за наявністю або відсутністю каламутності (зростання) в лунках. Наявність зростання в лунках з «малої» і «великий» концентрацією антибіотика свідчить про резистентності культури до даного антибіотика. Наявність зростання в лунці з «малої» концентрацією препарату і відсу...
