ків, пневмококів і гемофільних паличок типу «b». В інших випадках, відповідно до даних бактеріоскопічного дослідження, до зазначеного набору середовищ додають будь адекватні поживні середовища (желточно-сольовий агар, середа Ендо, середу Сабуро та ін.) Для виділення та ідентифікації «інших» збудників ГБМ.
Після отримання росту мікроорганізмів на щільних середовищах з вирослих колоній готують мазок за Грамом, визначають оксидазу, каталазу і проводять подальшу біохімічну, серологічну ідентифікацію, визначають чутливість до антибіотиків.
Бактеріологічний посів носоглоткового слизу
Посів виконують негайно після забору матеріалу або після доставки матеріалу в лабораторію на чашки з сироватковим агаром і на чашки з селективним сироватковим агаром (в якості селективної добавки використовують лінкоміцин). Матеріал засівають шляхом втирання тампона на чверть чашки. Частину агару на чашці засівають штриховим методом за допомогою стерильної бактеріологічної петлі. Засіяні чашки інкубують в умовах термостата при 37 ° С протягом 24 год. При виявленні колоній, візуально схожих з ростом менінгококів, виконують відсів на чашки з сироватковим агаром. Після культивування посівів в умовах термостата при 37 ° С з вирослих колоній готують мазок за Грамом в модифікації Калини, визначають оксидазу, каталазу і проводять подальшу ідентифікацію.
Реакція латекс-аглютинації (експересс - метод)
Найбільш простим методом, що не вимагає складного обладнання та дорогих реактивів, є метод латекс-аглютинації, що дозволяє протягом 15 хв дати висновок про відсутність або наявність в СМЖ хворого специфічних антигенів. Реакцію проводять при наявності ознак гнійного запалення в лікворі та/або при бактеріоскопічному виявленні в ньому збудників. Попередньо СМЖ необхідно прогріти протягом 5 хв при 100 ° С і відцентрифуговувати при 1500 - 2000 об./Хв. Для проведення реакції використовують прозору надосадову рідину. Одну краплю кожного латексного реактиву (попередньо реактиви рекомендується ретельно струснути) наносять на спеціальні паперові карти, прикладені до набору. Потім додають 30 мкл спинномозкової рідини (Надосадова фракція) до кожної краплі латексного реактиву. Перемішують чистим аплікатором. Обережно похитують паперову карту. Аглютинація протягом 2 хв з одним з латекс-діагностичних препаратів свідчить про присутність у випробуваному зразку специфічного антигену. Для виконання реакції використовують набори латекс-діагностичних препаратів, дозволені до застосування в Україні в установленому порядку.
Зустрічний імуно-електрофорез (ВІЕФ експрес-метод)
Реакція дозволяє за допомогою специфічних антисироваток виявляти полісахаридний антиген збудника в СМЖ і сироватці крові хворого вже в перший день дослідження матеріалу. Для проведення реакції необхідні: проба СМЖ (осад, якщо ліквор каламутний) та/або сироватка крові, преципитирующие антисироватки, веронал-медіналовий буфер, 1% -й агар на веронал-медіналовом буфері, будь-який апарат для іммуноелектрофореза, скляні пластини розміром 9? 12 см, трафарети, пробійники для агару, відсмоктуючі агар пристрої, пастерівські піпетки або дозатори з наконечниками, фільтрувальний папір, предметний столик або інший об'єкт з ідеально рівною поверхнею.
У апарат для іммуноелектрофореза заливають веронал-медіналовий буфер, що містить в 1 л дистильованої води 21,9 г мединал і 3,35 г вероналу (веронал попередньо нагрівають на водяній бані в невеликій кількості дистильованої води до повного розчинення ). Вимірюють рН і доводять його до рівня 8,6. Далі на веронал-медіналовом буфері (попередньо розвести дистильованою водою в 4 рази) готують 1% -й агар. На 100 мл буфера додають 1 г агару, нагрівають на водяній бані до повного розчинення і в гарячому, але кілька охолодженому вигляді (60 - 70 ° С) в кількості 20 мл наносять на скляні пластини розміром 9? 12 см. Пластину попередньо поміщають на рівну горизонтальну поверхню. Після застигання агару спеціальним пробійником або металевою трубкою з діаметром 3 мм висікають два паралельні ряди отворів по довжині скла на відстані 3 мм один від одного.
Специфічні антисироватки вносять в лунки агару з боку анода (+), а випробувану пробу СМЖ і/або сироватку крові - з боку катода (-). В окремі лунки поміщають позитивний контроль. В якості позитивного контролю використовують антигенний препарат (полісахарид) і гомологичную антисироватки. Підготовлену пластину поміщають в апарат для іммуноелектрофореза, з'єднують скло і буфер за допомогою фільтрувального паперу і включають апарат у мережу. Час експозиції 20 - 30 хв при силі струму 12 ма. Результат враховують через 10 хв після вимикання апарата. Реакцію вважають позитивною, якщо між лунками проявляються чіткі лінії преципітації, які добре видно в прохідному світлі. Рекомендується п...
