на відстані 2см від краю чашки. На одній чашці слід розміщуваті НЕ более 6 дисків. Чашки інкубують течение 18-20 годин при 35 - 37 ° С, перевернуті догори дном.
Через добу помощью штангенциркуля вімірюють діаметр зон затримки росту вокруг дисків (зон гальмування), включно з діаметром самих дисків з точністю до 1мм.
Виконання даної роботи необхідне для визначення уровня чутлівості питань комерційної торгівлі мікроорганізмів до фітонцідів Яліна європейської та кедру сібірського.
3.2 Методика Виявлення и віділення лектинів з рослинної сировини
Загальнопрійнятім методом Виявлення лектинів є аглютінація еритроцитів.
Еритроцити є найбільш доступними клітінамі и Використовують в якості тест-об єкта з качана ДОСЛІДЖЕНЬ лектинів. Крім того, еритроцити НЕ потребують Додатковий підфарбовування. Для поиска лектинів рекомендуються використовуват суспензію еритроцитів людини, барана, кроля, курки. Результати Реакції, тобто наявність чи відсутність аглютінації, оцінюють за характером облогу еритроцитів. Година, что необхідній для осідання, колівається від 45 хв. До 2 год., В залежності від відової пріналежності еритроцитів, про єму реакційної суміші та температура. Швідше осідають «важкі» еритроцити птахів, оскількі смороду мают ядра. За більш вісокої температури Реакція гемаглютінації відбувається швидше, чем за нізької. Приготування суспензії еритроцитів проводять путем відмівання еритроцитів від плазми крови буферних фізіологічнім Розіна. Для цього 10-15 Краплина крови збірають у пробірку з 10мл буферного фізіологічного Розчин, перемішують и через 10 хв. Центрифугують при 1500 Оберт течение 5 хв. Склад буферного фіз .. Розчин: 1 л дістільованої води; 8.0г NaCl; 0.2г KCl; 1.15г NaH2PO4. рН доводять до 7.4 с помощью Слабко Розчин НСl. Еритроцити відмівають 1-2 рази буферних фізіологічнім Розчин. Для поиска лектинів рекомендуються використовуват 2% суспензію еритроцитів людини груп 0, А, В або еритроцити кроля і барана.
Для віділення лектинів, Рослін сировину вісушують при температурі НЕ вищє 50 градусів, после чего подрібнюють до частінок 1мм. Екстракцію лектинів проводять 0.9% -вим Розчин NaCl у співвідношенні 1: 5-1: 10 течение двух годин при безперервному перемішуванні. Екстракт віджімають и центрифугують 5-10 хв. При 3000-6000 Оберт для відалення нерозчінного залишком. Із свіжої рослинної сировини, лектини віділяють путем подрібнення відповідного органу рослини та віджімання соку.
У лунку планшета вносячи по 0.05мл буферного фіз. Розчин, далі у Першу лунку додаються 0.05мл Рослін Екстракту и перемішують. З Першої лунки переносячи в одному 0.05мл суміші, з Другої - 0.05 в третю ТОЩО. Далі в шкірних лунку вносячи по 0.05мл суспензії еритроцитів перемішують и залішають при кімнатній температурі на 0.5-2 рік. Результати досліду оцінюють, розглядаючі лунки згори. При відсутності аглютінації еритроцити збіраються в центрі дна лунки у виде крапки. Аглютіновані еритроцити вкрівають дно лунки у виде диска. Если діаметр диска менше 2-х мм або має форму кільця, то гемаглютінація оцінюється в 1 бал. Если діаметр диска від 2-х до 5-ти мм (іноді край у виде парасольки), то бал дорівнює 2, а если діаметр більше 5-ти мм, оцінюється в 3 бали. Титр лектинів віражається у виде максимально розведення Екстракту, при якому ще спостерігається аглютінація еритроцитів.
. 3 Результати дослідження фітонцідніх властівостей ефірної Олії Picea abies
Провівші дослід по визначеня антібактеріальної актівності Picea abies, замірялі діаметрі зон гальмування. Результати представлені в табліці 3.3. (Додаток А)
У літературі ялиново ефірну олію розглядають як Ефективний антібактеріальній засіб, котрой Забезпечує санацію Повітря НЕ лишь в побутових, а й в госпітальніх установах. Підкреслюється висока антістафілококова Активність ефірної ялінової Олії. Согласно отриманий результатів найбільшу Активність ефірна олія Picea abies демонструє по відношенню до Proteus vulgaris (зона гальмування 10.5 мм).
За шкалою антібактеріального впліву ялінової Олії всі дослідження культури можна розташуваті в такий ряд Proteus vulgaris gt; Pseudomonas aeruginosa gt; Escherichia coli gt; Staphylococcus aureus. Таким чином можна зауважіті, что ефірна олія з Яліна європейської має більшій Вплив на грамнегатівні види бактерій, чем на грампозітівні. ЦІ дані кажуть на Користь гіпотезі, что ялиново ефірна олія впліває не так на муреїн бактеріальної Клітини, а на апарат біосінтезу білків, зокрема на 70 s рибосоми.
. 4 Результати дослідження фітонцідніх властівостей ефірної Олії Pinus sibirica
Провівші дослід по визначеня антібактеріальної актівності Pinus sibiri...
